三氯化鋁抑制大鼠骨形成及Wnt-β-Catenin信號轉導機制.pdf

1、為探討三氯化鋁(AlCl3)抑制骨形成的分子機制，本實驗將200只4周齡雄性Wistar大鼠隨機分成染鋁組（AlCl3·6H2O，64mg/kg·B.W.）和對照組（蒸餾水）。實驗設染鋁30d、60d、90d、120d四個檢測點，記錄大鼠臨床癥狀和體重，取血清及股骨組織。采用雙能X線骨密度儀檢測骨密度(BMD);采用火焰原子吸收分光光度法測定血清和骨組織中鋁含量，qRT-PCR技術檢測Wnt3a、 Fzd2、LRP5、β-catenin

2、、TCF4、c-myc、cyclin D1、Dkk1、sFRP1mRNA的表達;ELISA方法檢測Fzd2、LRP5受體活性;western blot方法檢測Wnt3a、β-catenin蛋白的表達;采用EMSA方法檢測核轉錄因子TCF4轉錄活性，結果表明:
　　(1)染鋁組大鼠體重顯著低于對照組，說明AlCl3暴露抑制大鼠正常的生長發(fā)育。
　　(2)染鋁組大鼠BMD在120d顯著低于對照組，說明AlCl3暴露可誘發(fā)骨丟失，

3、抑制骨形成。
　　(3)染鋁組大鼠血清和骨中鋁含量均顯著高于對照組，說明鋁可在大鼠骨組織中蓄積。
　　(4)染鋁組大鼠骨中Wnt3a mRNA及蛋白表達量，F(xiàn)zd2、LRP5 mRNA表達量及膜受體活性，自染鋁60d顯著低于對照組，說明AlCl3可抑制Wnt3a/β-catenin信號通路的啟動。
　　(5)染鋁組大鼠骨中β-catenin mRNA及蛋白表達量，核轉錄因子TCF4 mRNA表達量及轉錄活性自染鋁60d

4、顯著低于對照組，說明AlCl3下調Wnt3 a/β-catenin信號通路，并抑制核轉錄因子活性。
　　(6)染鋁組大鼠骨中c-myc、cyclin D1 mRNA表達量自染鋁60d極顯著低于對照組，說明AlCl3抑制Wnt3a/β-catenin信號通路下游靶基因的表達。
　　(7)染鋁組大鼠骨中Dkk1 mRNA表達量自染鋁60d顯著高于對照組;sFRP1 mRNA表達量自染鋁90d顯著高于對照組，說明AlCl3可誘導W