28706.家蠶sir2基因的表達及其功能的初步研究_第1頁
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1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶Sir2基因的表達及其功能的初步研究姓名：梁丹軍申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：張耀洲20100301浙江理工人學碩十學位論文AbstractSir2(silenceinformationregulator2)familyisatypeofconserveddependedNADhistone／nonhistoneclassIIIdeacetylasewhichcouldbefoundf

2、romarchaeastomammalsAsaSir2proteinfamilysirtuinsplayallimportantroleinphysiologicalregulationsuchasnervoussystem，longevityandSOonAnewgeneWasobtainedfrompupaecDNAlibraryofsilkwormconstructedbyourlaboratoryAftersequenceali

3、gnmentsanalysedinNCBI，itWaspresumedthatthisgenecodedSir2relatedproteinandWasnamedasBmSir2，ofwhichtheGenBankaccessionnumberWasNM001043472ThegenehasanORFof1164bpcodingapolypeptideof387aminoacidresiduesItcontainsaSIRTldomai

4、nofSIR2superfamilywimapredictedmolecularmassof4337kDandatheoreticalpIof494BmSir2WasclonedintopET一28a()vectorandtransformedintoEcoliRosettacompetentcellsforexpressionThefusionproteinWasexpressedsuccessfullyinRosettabyaddi

5、ngIPTGasinductorThemolecularweightofthisfusionproteinwithHis—tagis4787kDAfterNi2affinitychromatographytheHisBmSir2washighlypurifiedandusedtoimmunizeamaleNewZealandrabbittoobtainthepolyclonalantibodyagainstBmSir2whosetite

6、rWaslargerthan1：12800byELISAassayanalysisTotalproteinsofvariousdevelopmentalstagesofsilkwormandthedifferenttissuesproteinsofthefifthinstarlarvaewereextractedforWesternblotanalysisTheresultsshowedthatthedistributingofBmSi

7、r2infourstagesofsilkwormisdifferentwitllthehighestintheeggandthelowestinthefifthinstarlarvaeInthefifthinstarlarvae，BmSir2proteinwasonlyfoundinfourdifferentlarva’Stissues：Silkgland，fat，tracheaandheadSubcellularlocalizatio

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