大豆莖尖再生系統(tǒng)的研究及農(nóng)桿菌介導的Bt基因的轉(zhuǎn)化.pdf

1、大豆是重要的糧食作物，是植物蛋白的主要來源，在國內(nèi)外市場上占有十分重要的地位，大豆食心蟲一直嚴重危害著我國的大豆生產(chǎn)。植物基因工程及相關(guān)生物技術(shù)的持續(xù)發(fā)展，為大豆遺傳育種開辟了一條嶄新的途徑。但大豆愈傷組織難以分化并形成再生植株，大豆一直是最難轉(zhuǎn)化的植株之一。建立高效的再生體系并能成功的應用于外源基因的導入是大豆遺傳轉(zhuǎn)化的核心所在。本研究通過對大豆再生過程中各個因素的優(yōu)化，建立了高效的大豆莖尖再生轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，并通過農(nóng)桿菌的介導成功的將Bt

2、基因?qū)氪蠖?。其主要結(jié)果如下： 1.大豆莖尖經(jīng)過MSB+6-BA3.0mg/L+IBA0.15mg/L預培養(yǎng)，再植入MSB+6-BA0.5mg/L+IBA0.02mg/L培養(yǎng)基中，2周后外植體項部有大量叢生芽出現(xiàn)，待芽伸長到2～3cm切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，兩周左右有根長出，待根健壯移栽可得到完整的再生植株，此再生體系歷時5～7周比子葉節(jié)再生體系在周期上略有縮短。 2.大豆品種對農(nóng)桿菌的敏感性普遍偏低，并且在基因型之間存在顯

3、著差異，這種差異和大豆再生頻率在基因型之間的差異有一定的相關(guān)性。 3.農(nóng)桿菌的感染時間和共培養(yǎng)時間均對大豆的轉(zhuǎn)化有明顯的影響，感染時間以12分鐘左右為宜；共培養(yǎng)時間以2～3天為宜。感染時間和共培養(yǎng)時間之間存在一定的交互影響，在本試驗條件下，兩者的最佳組合為感染12分鐘共培養(yǎng)60小時。 4.感染之前的預培養(yǎng)能提高莖尖的轉(zhuǎn)化頻率，最適宜的預培養(yǎng)為1d左右。 5.在農(nóng)桿菌浸染的時候通過超聲波的輔助處理，能在外植體上制造