表達(dá)馬立克氏病病毒gI基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫保護(hù)作用.pdf

1、該研究以MDV gI為研究對(duì)象,以雞痘病毒(FPV)中國(guó)株為載體,構(gòu)建表達(dá)MDV gI基因的重組雞痘病毒(rFPV),在構(gòu)建成功表達(dá)MDV gI的rFPV的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步分析rFPV-gI的穩(wěn)定性及雞對(duì)rFPV-gI的抗體反應(yīng)性,然后研究它的免疫保護(hù)效力,為研制rFPV-MDV-gI基因工程疫苗,進(jìn)一步開(kāi)發(fā)多價(jià)MDV基因工程重組疫苗奠定基礎(chǔ).根據(jù)MDV 648A株病毒基因組gI基因序列,我們?cè)O(shè)計(jì)了兩個(gè)引物,用PCR擴(kuò)增出MDV gI基因

2、.通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳,獲得一條1060 bp DNA條帶,與MDV gI基因的大小是一致.在此基礎(chǔ)上,用Qiagen公司膠回收試劑盒來(lái)純化PCR產(chǎn)物.結(jié)果顯示,rFPV感染的CEF有很強(qiáng)的熒光,而FPV(wt)感染的CEF沒(méi)有熒光.說(shuō)明MDV gI得到表達(dá),此表達(dá)MDV gI基因rFPV命名為rFPV-MDV 648gI.用rFPV-MDV648gI感染CEF,傳代20次后,此rFPV仍然能夠在CEF上穩(wěn)定復(fù)制.用10<'4>PFU r

3、FPV-MDV648gI及FPV(wt)分別接種1日齡SFP雞,飼養(yǎng)于帶正壓過(guò)濾空氣隔離器中,接種前及接種后20天采血收集血清,用間接免疫熒光法(IFA)分析血清與感染MDV的CEF反應(yīng)情況.結(jié)果表明接種FPV-MDV648gI后雞血清中含有抗gI抗體.此結(jié)果表明表達(dá)MDVgI基因的rFPV有一定程度的抗超強(qiáng)毒株免疫保護(hù)力.該研究是國(guó)內(nèi)外首次報(bào)導(dǎo)構(gòu)建表達(dá)MDV gI基因重組FPV,首次證實(shí)rFPV-MDVgI具有一定程度的抗超強(qiáng)毒株免疫