抑制Hedgehog信號通路對小鼠胚胎間充質干細胞成脂分化的影響.pdf

1、肌內脂肪是影響豬肉風味的重要因素之一，肌內脂肪含量過低導致肉制品風味下降。肌內脂肪含量性狀與瘦肉率性狀之間呈負相關，單靠遺傳育種同時解決豬的瘦肉率和肌內脂肪含量問題已經遇到瓶頸。因此我們試圖尋求一種育種方式能在提高瘦肉率的同時又保證肌內脂肪含量不降低。通過Hedgehog信號途徑在胚胎發(fā)育期調控間充質干細胞向脂肪方向分化，以此機理指導豬的育種工作，篩選出提高豬的瘦肉率并能增加肌內脂肪含量的最佳育種組合，為我國瘦肉型豬的培育和豬肉品質調控

2、研究提供新的研究思路。
　　Hedgehog信號通路廣泛存在于脊椎動物和無脊椎動物體內，在動物胚胎多種組織器官的生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。近年來，越來越多的國內外研究已證明，Hedgehog信號通路在動物脂肪細胞的生長發(fā)育過程中發(fā)揮調控作用。激活動物體內Hedgehog信號通路能夠抑制脂肪細胞的生長發(fā)育，然而反過來抑制動物體內的Hedgehog信號通路是否能促進脂肪細胞的分化尚未明確。因此，本文就此問題展開研究，旨在尋找一種能在

3、不降低瘦肉率的前提下提高肌內脂肪含量的科學方法，為瘦肉型豬的培育和豬肉品質調控研究提供參考依據(jù)。
　　本研究旨在解析Hedgehog信號通路在小鼠胚胎間充質干細胞成脂分化過程中發(fā)揮的作用，為瘦肉型豬的培育和豬肉品質調控研究提供參考依據(jù)。本研究構建小鼠間充質干細胞 C3H10T1/2細胞系為試驗模型，用不同濃度環(huán)靶明（5μmol/L,10μmol/L,15μmol/L或20μmol/L）處理細胞，同時參考添加成脂誘導劑（10μg/m

4、L胰島素，1mmol/L地塞米松，200μmol/L吲哚美辛，0.5mmol/L IBMX）對細胞的成脂分化誘導作用，分別在誘導的第1天、第2天、第3天、第7天、第14天和第21天提取細胞 mRNA和蛋白用于后續(xù)試驗。qRT-PCR法檢測Hedgehog信號通路相關基因、成脂分化調控基因 PPARγ，C/EBPα以及成脂分化標志基因FABP4在轉錄水平上的表達情況；采用western blot法檢測Hedgehog信號通路蛋白、成脂分化

5、調控蛋白和FABP4蛋白的表達水平；利用油紅O染色法，檢測細胞內脂滴形成情況。
　　試驗結果發(fā)現(xiàn)，使用環(huán)靶明誘導C3H10T1/2細胞導致細胞Hedgehog信號通路各基因相對表達量下降，成脂分化調控基因以及成脂分化標志基因FABP4相對表達量升高。其中10μmol/L環(huán)靶明處理的細胞效果最明顯，Hedgehog信號通路各基因相對表達量顯著下降（P<0.05），成脂分化調控基因以及成脂分化標志基因FABP4相對表達量升高（P<0.