北山羊成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立及特性分析.pdf

1、北山羊?yàn)閲?guó)家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物，本研究將獲取的北山羊肌肉組織采用組織塊法培養(yǎng)，進(jìn)行了原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、冷凍與復(fù)蘇，建立了北山羊肌肉組織成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系，對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞部分的生物特性進(jìn)行了分析研究，并對(duì)在4種不同的培養(yǎng)基中、5種不同血清濃度梯度下細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行了比較。
　　結(jié)果顯示:北山羊肌肉組織成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，正常生長(zhǎng)，其組織塊在接種5d后，可觀(guān)察到有梭形細(xì)胞出現(xiàn)，并從組織塊向外周爬出，7d后多數(shù)游離出組織塊并

2、逐漸匯合。在細(xì)胞F5、F10、F15代，分別進(jìn)行了細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)的檢測(cè):計(jì)算貼壁率、比較細(xì)胞凍存前和復(fù)蘇后的存活率、繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)的測(cè)定顯示細(xì)胞生長(zhǎng)正常，隨著細(xì)胞傳代增加細(xì)胞增殖速度有所下降，三代的倍增時(shí)間分別為F5:35.65h，F(xiàn)10:43.29h，F(xiàn)15:48.40h。在染色體核型分析部分，選取了不同代次的100個(gè)中期分裂細(xì)胞，其中88％以上均為二倍體細(xì)胞，已經(jīng)大于建系正常二倍體占75-80％的要求，說(shuō)明即使經(jīng)過(guò)細(xì)胞的多

3、次傳代、凍存、復(fù)蘇，本實(shí)驗(yàn)所建立的細(xì)胞系遺傳特性是穩(wěn)定的，這種培養(yǎng)體系下培養(yǎng)的北山羊成纖維細(xì)胞，可以用于生物工程或其他生物學(xué)領(lǐng)域的研究。其性染色體表明研究對(duì)象為一只雄性北山羊。在MEM Alpha、DMEM/F12、M199、DMEM高糖四種培養(yǎng)基的對(duì)比中，MEM Alpha相較其他培養(yǎng)基更適合北山羊肌肉組織成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)。在血清濃度的選擇上，12％的濃度應(yīng)是最優(yōu)濃度。
　　本實(shí)驗(yàn)成功建立了北山羊肌肉組織成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)