早晚熟溫州蜜柑的MSAP分析.pdf

1、柑橘是熱帶和亞熱帶地區(qū)最重要的水果之一。溫州蜜柑是我國(guó)乃至東亞地區(qū)栽培面積最大的寬皮柑橘品種，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。絕大多數(shù)溫州蜜柑品種來(lái)源于芽變選系，因此在DNA水平上的差異很小，即使在成熟期上存在顯著差異的溫州蜜柑品種，用一般的分子標(biāo)記技術(shù)往往也難于區(qū)分。由于溫州蜜柑芽變材料多，基因遺傳背景較為一致，因此，溫州蜜柑是研究果實(shí)發(fā)育與成熟的理想材料。本文通過(guò)MSAP技術(shù)在同一時(shí)期檢測(cè)了20個(gè)早晚熟溫州蜜柑品種的基因組DNA甲基化模式，并利

2、用同一方法對(duì)不同時(shí)期的晚熟溫州蜜柑（青島溫州）和早熟溫州蜜柑（大分一號(hào)）果實(shí)和葉片的基因組DNA甲基化變化進(jìn)行了評(píng)估，對(duì)差異性條帶進(jìn)行測(cè)序，找出在溫州蜜柑果實(shí)成熟和發(fā)育過(guò)程中受甲基化調(diào)控的基因，從而對(duì)研究早晚熟溫州蜜柑品種間DNA甲基化的差異，探索柑檑果實(shí)在成熟過(guò)程中甲基化的改變，深入理鰓柑橘的成熟過(guò)程具有重要的作用。
　　本研究主要獲得如下結(jié)果:
　　1、大分1號(hào)、巖崎早生、日南1號(hào)、溫州8-76、隆園早溫州、溫州03-0

3、2、橋本、溫州03-05、宮本、大浦十個(gè)早熟溫州蜜柑品種以及壽太郎、尾張、清江、大津4號(hào)、寧紅73-19、伊木力、青島、杉山、林溫州、石川十個(gè)晚熟溫州蜜柑品種的MSAP分析表明，早熟溫州蜜柑和晚熟溫州蜜柑品種的基因組CCGG位點(diǎn)的甲基化程度和模式都存在顯著差異。早熟溫州蜜柑品種CCGG位點(diǎn)的外部平均甲基化(8.47％)明顯多于晚熟溫州蜜柑品種CCGG位點(diǎn)的外部平均甲基化(6.74％);而早熟溫州蜜柑品種CCGG位點(diǎn)的內(nèi)部平均甲基化(24

4、.98％)卻明顯少于晚熟溫州蜜柑品種CCGG位點(diǎn)的內(nèi)部平均甲基化(27.27％)。這暗示了溫州蜜柑在成熟過(guò)程中，CCGG位點(diǎn)的胞嘧啶甲基化整體改變趨勢(shì)是內(nèi)部胞嘧啶甲基化趨于減少，而外部胞嘧啶甲基化趨于增加。早熟溫州蜜柑品種中的兩個(gè)特早熟品種2003-02溫州和橋本的CCGG位點(diǎn)胞嘧啶外部甲基化最高分別為15.28％、15.46％;晚熟溫州中大津4號(hào)的CCGG位點(diǎn)檢測(cè)到的胞嘧啶外部甲基化也高達(dá)13.77％，而其他晚熟品種均遠(yuǎn)低于這個(gè)水平;

5、晚熟品種伊木力中檢測(cè)到CCGG位點(diǎn)胞嘧啶內(nèi)部甲基化高達(dá)44.37％，遠(yuǎn)高于其他所有品種的內(nèi)部甲基化水平。早熟溫州蜜柑品種總的甲基化水平(33.45％)略低于晚熟溫州蜜柑品種總的甲基化水平(34.01％)，這表明溫州蜜柑在成熟的過(guò)程中總的甲基化水平在降低。此外，在20個(gè)早晚熟溫州蜜柑品種中，每個(gè)品種CCGG位點(diǎn)的胞嘧啶外部甲基化均少于其內(nèi)部甲基化，檢測(cè)到總的外部平均甲基化率僅為7.62％，而總的內(nèi)部平均甲基化率高達(dá)26.11％。
　

6、　2、20個(gè)同一時(shí)期溫州蜜柑品種MSAP分析的差異片段測(cè)序表明，編碼G-蛋白α亞單位基因(G-protein alpha subunit)和EST序列CX052976.1的甲基化模式在早熟溫州蜜柑品種和晚熟溫州蜜柑品種間有明顯差異;青島溫州、大分1號(hào)兩個(gè)溫州蜜柑品種不同時(shí)期的MSAP分析表明，組氨酸三聯(lián)體家族的鋅結(jié)合蛋白基因(Zinc-binding protein of the histidine triad(HIT)family)和

7、EST序列CX071135.1的甲基化模式在溫州蜜柑成熟過(guò)程中，有顯著改變。因此，G-蛋白α亞單位基因(G-protein alpha subunit)、組氨酸三聯(lián)體家族的鋅結(jié)合蛋白基因(Zinc-binding protein of the histidine triad(HIT) family)以及兩個(gè)EST序列CX052976.1和CX071135.1可能在溫州蜜柑果實(shí)成熟過(guò)程中扮演著重要作用，并且其功能受到甲基化的調(diào)控。

8、　　3、本實(shí)驗(yàn)表明，MSAP是檢測(cè)溫州蜜柑品種之間DNA甲基化特異性的有效方法。在本文中，大分1號(hào)、巖崎早生、日南1號(hào)、溫州8-76、隆園早溫州、溫州03-02、橋本、溫州03-05、宮本、大浦、壽太郎、尾張、清江、大津4號(hào)、寧紅73-19、伊木力、青島、杉山、林溫州、石川20溫州蜜柑品種中，溫州8-76、隆園早溫州、橋本、清江、大津4號(hào)、伊木力、石川、青島、巖崎早生、溫州03-02、橋本、寧紅73-19、杉山13個(gè)品種表現(xiàn)出了甲基化特