KAP6,KAP7和KAP8基因作為羊毛分子標記的初步研究.pdf

1、羊毛是重要的畜牧業(yè)產品之一,也是重要的紡織工業(yè)原材料。羊毛的品質主要表現在羊毛的細度和卷曲度上,隨著羊毛紡織技術的不斷提高和人們對自然、高檔、輕薄和柔軟服飾的追求,直徑在21.5μm以下的細羊毛的需求量顯著增加。近些年來,我國的羊毛產量雖然不斷增長但是高品質羊毛產量不足,羊毛質量參差不齊,羊毛進口量逐年攀升。因此,培育出產高品質、高產量羊毛的綿羊品種成為綿羊育種的時代需求,分子標記育種是實現高品質綿羊育種的重要輔助手段,能夠大大加快育種

2、進程。
　　鑒于此,本論文以中國五個綿羊品種(中國美利奴、薩克福、湖羊、羅姆尼、中國美利奴×湖羊)作為研究對象,采用分子生物學技術手段研究與羊毛細度相關的候選基因(KAP6, KAP7和KAP8基因)在不同品種綿羊皮膚中的表達量,分析基因的編碼區(qū)及其側翼序列的多態(tài)性并用染色體步移法克隆其上游未知序列,最后對編碼區(qū)上游序列進行生物信息學分析。從而在轉錄水平和基因組水平上探討羊毛品質候選基因的多態(tài)性與羊毛直徑品質間的關系,為細毛羊育種

3、提供理論參考。結果總結如下:
　　(1)KAP6, KAP7和KAP8基因在毛囊組織中的表達采用熒光實時定量PCR(Real-time Quantity PCR,RQ-PCR)檢測KAP6, KAP7和 KAP8基因在薩?？搜?粗毛羊)和中國美利奴羊(細毛羊)皮膚毛囊中的表達水平。結果表明,mRNA表達量和羊毛直徑高度正相關,相關系數分別為0.941(P=0.00)、0.842(P=0.01)和0.948(P=0.00);三個基因

4、在薩?？搜蚱つw組織中的表達量顯著高于在中國美利奴羊皮膚組織中的表達量,分別達到4.23、5.74和5.87倍。
　　(2)四個綿羊品種KAP6, KAP7和KAP8基因的克隆及其多態(tài)性研究用PCR技術擴增綿羊KAP6, KAP7和KAP8基因,采用直接測序和載體克隆測序技術,檢測其在中國美利奴羊、湖羊、羅姆尼羊和美利奴-湖羊雜交羊中四個群體的多態(tài)性。結果發(fā)現,KAP6基因檢測到六種多樣性序列,KAP7基因檢測到兩種多樣性序列,KA

5、P8基因檢測到五種多樣性序列。在KAP7基因位點發(fā)現的兩個品種特異性序列和一個品種特異性SNP點值得深入研究。
　　(3)KAP6, KAP7和KAP8基因上游序列的擴增及其生物信息學分析根據GenBank的KAP6, KAP7和KAP8基因的序列設計特異性引物,采用TAIL-PCR(交錯式熱不對稱PCR,thermal asymmetric interlaced PCR)分別克隆獲得三個基因5′未知序列片段,然后通過PCR克隆測

6、序的方法分別得到KAP6, KAP7和KAP8基因CDS區(qū)上游未知序列1877bp、3224bp和1826bp的核酸序列信息。然后用DNAman序列分析軟件將測得的未知序列與GenBank中已知序列拼接,分別得到KAP6, KAP7和KAP8基因CDS區(qū)上游2918bp,3619bp和2801bp長的片段。對上游序列采用生物信息學分析軟件Genomatrix分析,得到的結果進行生物信息學預測發(fā)現了一些調控元件的結合位點,為進一步分析KA