農(nóng)桿菌介導的柑橘遺傳轉化及轉基因植株抗性鑒定.pdf

1、柑橘細菌性潰瘍病(Citrusbacterialcankerdisease，CBCD)是一種國內(nèi)外檢疫性病害，嚴重制約著柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，創(chuàng)制抗病品種是解決潰瘍病危害的一個重要途徑。本研究通過根癌農(nóng)桿菌轉化，將pthA基因和Xa27基因轉化潰瘍病敏感類型檸檬（Citrus.LemonL.）中，獲得轉基因植株，并對轉基因植株進行鑒定和接種分析。主要結果如下:
　　1、通過農(nóng)桿菌介導的上胚軸轉化方法，pthA基因轉化約500個外植

2、體，鑒定57株檸檬，其中陽性植株45株，陽性率為78.9％。Xa27基因轉化約1000個外植體，鑒定29株檸檬，其中陽性植株10株，陽性率為34.5％。
　　2、通過基因表達分析，篩選pthA轉化的拌7、＃22、＃23三個系進行潰瘍病接種試驗，發(fā)現(xiàn)，接種4d后，野生型和轉基因植株均開始發(fā)病。但前者發(fā)病率達到100％，病點率86％。轉基因株系＃7和＃23發(fā)病率雖然達100％，但病點率分別為72％和47％，較野生型低。同時發(fā)現(xiàn)，野生型

3、植株病斑顯著大于＃7和＃23。轉基因株系＃22發(fā)病率為75％，病點率為33％，病斑大小為0.028cm2，三個參數(shù)均低于野生型檸檬。在病情指數(shù)上，轉基因檸檬三個系都明顯低于野生型。表明，轉基因植株抗?jié)儾∧芰υ鰪姟?br>　　3、對轉Xa27檸檬＃5和＃25兩個系進行潰瘍病接種試驗。接種4d后發(fā)現(xiàn)，轉基因株系＃5和＃25發(fā)病率分別為50％和33.3％，病點率分別為14％和40％，病斑大小分別為0.019cm2和0.012cm2，遠遠小于