長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀相關(guān)基因差異表達的研究.pdf

1、長江三角洲白山羊是我國著名的筆料毛型山羊品種，其所產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)三類毛是制高檔毛筆的獨特原料。由于地方良種資源的保護重視程度不夠，國外山羊品種導(dǎo)入率不斷升高以及筆料毛山羊的管理方式、飼養(yǎng)條件的參差不齊，導(dǎo)致了目前優(yōu)質(zhì)筆料毛生產(chǎn)逐漸萎縮，優(yōu)質(zhì)筆料毛種質(zhì)資源的保護工作陷入了困難的境地，形勢較為嚴(yán)峻。目前，對長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的研究主要是集中在宏觀領(lǐng)域，而從分子水平闡明優(yōu)質(zhì)筆料毛生成的機理，在國內(nèi)外的研究中尚未見過相關(guān)的報道。因此，本研

2、究重點從分子水平上對長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀形成的機理進行研究，以達到保護和利用好長江三角洲白山羊這一珍貴遺傳資源的目的，為今后分子選種和育種奠定基礎(chǔ)，具有非常重要的意義。
　　本試驗旨在篩選長江三角洲白山羊皮膚中筆料毛性狀差異表達的基因，研究和探討差異表達的基因?qū)?yōu)質(zhì)筆料毛生成的影響和作用。利用mRNA差異顯示技術(shù)，比較優(yōu)質(zhì)筆料毛個體頸脊部與腹側(cè)部的皮膚組織，以及比較優(yōu)質(zhì)筆料毛個體與非筆料毛型個體頸脊部皮膚組織中基因的差異

3、表達，通過反向Northern點雜交去除假陽性條帶，經(jīng)克隆、測序后，得到的序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行Blastn檢索，與已知序列進行同源性比較，并預(yù)測其功能。
　　研究結(jié)果顯示:(1)通過mRNA差異顯示共篩選出20條差異條帶，其大小在150～500bp之間，經(jīng)反向Northern點雜交驗證，獲得6個陽性的差異表達片段;(2)差異片段克隆、測序后在NCBI數(shù)據(jù)庫中與已知序列進行同源性比較，發(fā)現(xiàn)3個差異片段與已知功能基因相似，分別為

4、趨化素樣因子3(CKLF-like MARVEL transmembrane domaincontaining3，CMTM3)、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白/骨粘連蛋白(secreted protein，acidic, cysteine-rich/osteonectin，SPRAC)和鈣結(jié)合蛋白S100A4(S100 calcium bindingprotein A4，S100A4);其他3個片段與已知序列相似但功能未知。
　　分析

5、結(jié)果表明:(1) CMTM3基因過量表達可抑制雄性激素受體(androgen receptor，AR)的轉(zhuǎn)錄活性，可能會通過抑制AR轉(zhuǎn)錄活性的方式間接調(diào)控優(yōu)質(zhì)筆料毛的形成;(2)SPARC基因參與了多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并調(diào)節(jié)多種生長因子，如Wnt、FGF、TGF-β、IGF-1、血小板衍化生長因子(PDGF)等，可能通過這些信號通路和細胞因子影響毛發(fā)的結(jié)構(gòu)和形狀的形成，對長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛的形成產(chǎn)生一定的作用;(3)鈣結(jié)合蛋白S10

6、0A4基因與其他表皮分化相關(guān)基因共同定位于染色體lq21上（該區(qū)域為表皮分化復(fù)合體），與皮膚分化、毛囊及皮膚腺體的成熟密切相關(guān)并參與毛發(fā)生長和周期循環(huán)。(4)三個功能未知的序列是毛發(fā)生長與毛發(fā)循環(huán)分子調(diào)控機制研究中的新發(fā)現(xiàn)，其功能需要進一步驗證。
　　這些已知基因和未知片段對長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛的形成所起的作用還需要進一步的研究，其調(diào)控機制還未完全闡明。本研究篩選出6個差異片段可以為今后進一步研究長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛形