致病疫霉誘導下番茄小RNA文庫構建及sly—miR396的功能特性研究.pdf

1、MicroRNA（miRNA）是由約22個核苷酸組成的內源性非編碼小分子RNA，廣泛存在于真核細胞中。多項研究表明，miRNA在植物-病原物互作過程中起著至關重要的調控作用。番茄是常見的經(jīng)濟作物，世界各地均有大面積種植，由致病疫霉引起番茄晚疫病常給番茄生產(chǎn)造成嚴重損失。隨著miRNA研究技術的不斷完善，高通量測序技術因其獨特的優(yōu)勢逐漸被廣泛應用于miRNA的挖掘中。miR396是植物中特有的一類保守miRNA，雖有文獻證明其在番茄中存在

2、，但目前仍沒有關于它在番茄中功能特性的研究報道。因此，基于上述研究需要，本研究利用高通量測序方法構建了2個番茄小RNA文庫，并分析了miR396在番茄抗病抗逆中的作用。
　　首先，本研究通過高通量測序方法構建了致病疫霉誘導下的2個番茄小RNA文庫，獲得了230個已知和67個新的miRNA;差異表達分析顯示118個miRNA在致病疫霉侵染下表達量變化明顯;隨后又采用實時定量PCR驗證了11個miRNA的表達。靶基因預測及分析表明這些

3、miRNA參與植物-病原物互作過程。
　　其次，本研究從構建的文庫中挑選出可能與抗病相關的miR396，通過生物信息學方法分析了番茄miR396的特性并采用實時定量PCR分析了它在致病疫霉、激素、高鹽、干旱脅迫下的表達特性。結果表明，miR396均能對上述脅迫條件作出響應，并在致病疫霉處理下變化最為明顯。
　　為進一步了解miR396的功能特性，本文從番茄中克隆了MIR396基因，并且構建了相應的植物表達載體。miR396在