對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒衣殼蛋白基因的原核表達和真核表達以及抗體制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒病被國際獸疫局(OIE)列為“須向OIE申報的甲殼動物重要疾病”之一[1]。該病毒對凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）有較強的致病性，死亡率高達90％，嚴重將導致慢性矮小殘缺綜合癥(runt-deformitysyndrome，RDS)，對紅額角對蝦(Penaeusstylirostris)的致病性和致死率均較高[2]。
　　 本研究對廈門地區(qū)發(fā)病對蝦檢疫中分離得到對蝦IHHNV

2、，對IHHNV病毒的主要相關研究如下:
　　 1、IHHNV衣殼蛋白基因在大腸桿菌中的表達及抗體制備
　　 根據GenBank(NC-002190)IHHNV的全基因組序列，設計出主要結構蛋白基因Ⅳ的相應引物，從廈門發(fā)病的對蝦中，提取DNA，以此為模板，利用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增目的基因。再將目的基因分別與表達載體pGEX-6p(l)和pET-28a連接，構建重組表達載體(命名為pGEX-Ⅳ、pET-Ⅳ)，大腸桿菌

3、BL21中IPTG誘導表達，SDS-PAGE檢測，大小約為62kD和41kD。將pET-Ⅳ表達重組蛋白經純化，免疫小鼠。Western免疫印跡反應結果表明其抗體均可與pGEX-Ⅳ和pET-Ⅳ表達的蛋白發(fā)生特異性反應。
　　 2、IHHNV衣殼蛋白基因在畢赤酵母中的表達及抗體制備
　　 將該病毒主要結構蛋白基因克隆至畢赤酵母穿梭表達質粒pPIC9K，構建重組表達載體(命名為pPIC9K-Ⅳ)，酶切線性化后采用電穿孔法轉化到

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