柞蠶6-Tox基因的克隆及在大腸桿菌中的表達.pdf

1、鱗翅目昆蟲與高等動物一樣，本身可以抵御外來異物入侵，具有極強的先天免疫力。免疫系統(tǒng)包括體液免疫和細胞免疫，在細胞免疫系統(tǒng)中，通過血淋巴中的血漿細胞吞噬外來異物;而在體液免疫系統(tǒng)中，外來異物刺激可以促進各種與免疫有關的大分子物質(zhì)的產(chǎn)生，這些大分子物質(zhì)包括溶菌酶、抗菌肽和抗菌蛋白等?？咕鞍讓Χ喾N微生物具有著極強的殺傷能力，由于昆蟲類的抗菌蛋白具有廣譜抗菌能力和分子量小等優(yōu)點，所以抗菌蛋白的研究對于昆蟲防御系統(tǒng)的研究和抗菌藥物的研究均有著重

2、要的意義。
　　6-Tox是一種只存在于鱗翅目昆蟲中的具有免疫功能的蛋白質(zhì)，當外來生物侵入時分泌表達。本研究設計合成特異性Real-Time PCR引物，通過枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、大腸桿菌（Escherichia coli Top10）、真菌(S.cerevisiae W303-1A)以及柞蠶桿狀病毒(Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus)對柞蠶滯育蛹進

3、行誘導，采用實時定量PCR技術，對不同誘導條件下的不同組織中的6-Tox基因表達差異進行研究。根據(jù)柞蠶6-Tox基因序列，設計特異性引物，以大腸桿菌誘導的柞蠶滯育蛹脂肪體RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄后進行PCR擴增得到目的片段，并對6-Tox氨基酸序列進行生物學分析。構(gòu)建了6-Tox融合蛋白表達載體pGEX-6P-1-6-Tox，以大腸桿菌BL21為宿主菌對目的基因進行表達。通過對誘導溫度、誘導劑濃度和誘導時間進行實驗，確定了6-Tox基因在大