四個月季品種體細胞胚誘導及遺傳轉化的研究.pdf

1、月季(Rosa hybrida)是薔薇科薔薇屬的半常綠木本植物，是世界上栽培歷史最久、最受人們鐘愛的觀賞花卉之一，因其花色艷麗、香味濃郁，被譽為中國傳統(tǒng)十大名花之一，切花月季同時又是世界重要切花之一，具有很高的觀賞價值和商業(yè)價值。本試驗對四個現(xiàn)代月季切花品種的快速繁殖體系進行了建立，并以未展開復葉片為外植體，建立了體細胞胚發(fā)生途徑及再生體系。同時利用體細胞胚再生體系進行了遺傳轉化的初步研究。其主要研究結果如下：
　　 1.月季快

2、速繁殖體系的建立
　　 以現(xiàn)代月季品種‘卡羅拉’為試材，對其組培過程中消毒、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽等各個環(huán)節(jié)進行了研究。研究結果表明：消毒時去掉葉柄降低了污染率，且腋芽萌發(fā)良好；增殖培養(yǎng)基以MS+1.0mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉膠的效果最好，長勢健壯，不定芽增殖系數(shù)達到3.41；最適宜的生根培養(yǎng)基是1/2MS+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L

3、卡拉膠，平均根長在2.52cm，根系發(fā)達，根的生長狀態(tài)最佳。在移栽試驗中，經過6天煉苗處理，成活率達到94.44％。
　　 2.月季體細胞胚發(fā)生途徑及再生體系的建立
　　 以四個現(xiàn)代月季切花品種‘卡羅拉’、‘黑魔術’、‘假日公主’、‘莫尼卡’的未展開復葉片為外植體，通過直接途徑和間接途徑對體細胞胚誘導及再生等條件進行了研究。結果表明：基因型、外植體類型、不同激素種類及濃度組合、培養(yǎng)條件對體細胞胚誘導和植株再生都產生著重要

4、影響。四個月季品種的組培苗未展開復葉片和露地中的未展開復葉片都沒有通過直接發(fā)生途徑得到體細胞胚。以組培苗的未展開復葉片為外植體通過間接發(fā)生途徑，只有‘卡羅拉’有體細胞胚發(fā)生，其他三個月季品種均沒有得到體細胞胚?！_拉’體細胞胚的誘導率在不同的培養(yǎng)基上存在顯著差異，在MS+2.0mg/L ZT+0.1mg/L NAA+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠的培養(yǎng)基上誘導率最高，達到13.33％?！_拉’體細胞胚在MS+1.5mg/L

5、ZT+0.2mg/LNAA+0.1mg/L GA3+60g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠的培養(yǎng)基上生長旺盛，光澤度好，增殖系數(shù)為4.02，體細胞胚組織比例達到90％以上，有次生胚長出，增殖效果最好?！_拉’體細胞胚在MS+1.0mg/L6-BA+0.01mg/L IBA+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠的培養(yǎng)基上體細胞胚萌發(fā)率最高，達到43.33％，單位體細胞胚成苗數(shù)是1.31。
　　 此外，‘卡羅拉’組培苗在生根試驗

6、中，光照條件培養(yǎng)于1/2MS+1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉膠的培養(yǎng)基上，8周之后發(fā)現(xiàn)在根軸部位通過直接發(fā)生途徑長出子葉狀體細胞胚。然后置于體細胞胚增殖培養(yǎng)基：MS+1.5mg/L ZT+0.2mg/LNAA+0.1mg/L GA3+60g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠培養(yǎng)，增殖效果顯著。
　　 3.以體細胞胚為轉化受體的月季遺傳轉化的研究
　　 以‘卡羅拉’體細胞胚作為農桿菌介導遺傳轉化的轉