禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒感染對SPF雞主要免疫器官白細胞介素2產生的影響.pdf

1、白細胞介素-2是由激活的T淋巴細胞產生的一種細胞因子，這種細胞因子具有誘導T細胞增殖，促進B細胞分化及分泌抗體，誘導產生其他細胞因子，增強單核細胞、NK細胞以及LAK細胞的殺傷活性，在機體的免疫反應中具有非常重要的免疫調節(jié)作用，因此，它在許多疾病的基礎性研究和臨床應用中有重要價值。目前，免疫抑制病對我國集約化養(yǎng)雞業(yè)造成了很大的危害，禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒感染后可導致體液和細胞介導免疫應答的嚴重抑制已有很多報道，了解免疫抑制機理并制定提

2、高雞的免疫應答策略正成為當前的研究熱點。本研究以禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒人工接種SPF雞造成的免疫抑制為模型，對雞白細胞介素2在免疫抑制中可能發(fā)揮的作用進行了初步探討。研究內容主要包括兩部分：
　　 1.成功建立了檢測雞白細胞介素2的SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR方法。根據(jù)GenBank上發(fā)表的雞白細胞介素2的基因序列，在保守區(qū)設計并合成特異性引物，并以核糖體蛋白亞基4基因為內參，采用SYBRGreenⅠ染料以建立實時

3、熒光定量RT-PCR檢測方法。將白細胞介素2與核糖體蛋白亞基4部分基因克隆至pMD18-T載體上，以各陽性質粒作為標準品，構建標準曲線，并進行了熔解曲線分析。結果表明，該方法對雞白細胞介素2mRNA的擴增效率為113％，線性范圍為10-2～10-6，相關系數(shù)為0.9928，最低能檢出100拷貝/μL；熔解曲線分析熒光定量RT-PCR產物在(80.2±0.8)℃出現(xiàn)單特異峰；從RNA提取到熒光定量PCR結束的檢測周期只需4h。本研究所建立

4、的雞白細胞介素2基因實時熒光定量RT-PCR方法靈敏度高、特異性強、檢測周期短，為在轉錄水平對雞IL-2的定量分析奠定了基礎。
　　 2.實時熒光定量RT-PCR檢測禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒感染SPF雞主要免疫器官中白細胞介素2基因表達量的研究。為了研究雞白細胞介素2基因在禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒感染SPF雞體內的表達水平，120只1日齡SPF雞隨機分為2組，禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒處理組和生理鹽水對照組。每個組分別在感染后7、

5、14、21、28、35、42和49d隨機取6只雞處死，迅速取胸腺、脾臟和法氏囊樣品用于RNA提取。應用所建立的SYBRGreenⅠ染料實時熒光定量RT-PCR方法，比較處理組和對照組IL-2基因mRNA相對表達量的變化。結果顯示，與對照組相比，處理組胸腺、脾臟和法氏囊中IL-2基因的表達量在感染后7d、14d、21d、28d、35d、42d和49d均呈現(xiàn)升高，除了21、28日齡雞的脾臟外，其他均為顯著差異(P<0.05)。本實驗為探討禽