LMW-GS基因Ee34轉(zhuǎn)化小麥及SRL-TRQ型ω-醇溶蛋白基因的克隆研究.pdf

1、長(zhǎng)穗偃麥草是改良栽培小麥最為重要的野生資源之一，已有的實(shí)驗(yàn)證明在該材料中含有促進(jìn)小麥面粉品質(zhì)特性的潛在的優(yōu)質(zhì)谷醇溶蛋白基因。其中，低分子量谷蛋白亞基基因Ee34含有7個(gè)半胱氨酸殘基，體外的面團(tuán)實(shí)驗(yàn)證明在加入該亞基后面團(tuán)優(yōu)質(zhì)相關(guān)特性顯著提高(Chenetal.2010)。在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了Ee34的真核表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的莖尖轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)化小麥主栽品種Jimai21，經(jīng)分子鑒定和遺傳分析后獲得了轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系;利用SDS-PAGE分析

2、了轉(zhuǎn)基因小麥的種子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分轉(zhuǎn)基因株系有特異蛋白大量表達(dá);同時(shí)設(shè)計(jì)了針對(duì)低分子量谷蛋白基因Ee34的基因特異分子標(biāo)記。以上結(jié)果將推進(jìn)小麥品質(zhì)育種的理論和應(yīng)用研究。
　　 小麥醇溶蛋白是胚乳中的主要儲(chǔ)藏蛋白，賦予面團(tuán)延展性。目前，在普通小麥中，已經(jīng)有大量的α/β-、γ-醇溶蛋白基因被克隆，但是關(guān)于ω-醇溶蛋白基因的克隆報(bào)道還較少，尤其是SRL-/TRQ-型ω-醇溶蛋白基因。根據(jù)現(xiàn)有的SRL-/TRQ-型ω-醇溶蛋白基因的全基因

3、和EST序列設(shè)計(jì)了一對(duì)兼并引物，以體細(xì)胞雜種漸滲系Ⅱ-12及其親本JN177和長(zhǎng)穗偃麥草的基因組DNA為模板，擴(kuò)增ω-醇溶蛋白基因。結(jié)果顯示，僅從長(zhǎng)穗偃麥草中鑒定了7個(gè)ω-醇溶蛋白基因，長(zhǎng)度變化在837bp～951bp，而在Ⅱ-12及其親本JN177中沒(méi)有獲得全長(zhǎng)序列。其中3個(gè)為SRL-型ω-醇溶蛋白基因，3個(gè)為T(mén)RQ-型ω-醇溶蛋白基因，另外1個(gè)TRQ-型ω-醇溶蛋白基因含有重復(fù)信號(hào)肽區(qū)域。推導(dǎo)的氨基酸序列發(fā)現(xiàn)這些ω-醇溶蛋白由兩側(cè)短