多胺誘導(dǎo)大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細(xì)胞一氧化氮的產(chǎn)生與氧或過氧化氫有關(guān).pdf

1、精胺（Spm）、亞精胺（Spd）和它們的二胺前體腐胺（Put）是小分子脂肪族多聚陽離子，廣泛存在于植物細(xì)胞中，與植物生長發(fā)育、形態(tài)建成和對逆境響應(yīng)密切相關(guān)。一氧化氮（NO）是一種植物細(xì)胞信號分子，在調(diào)節(jié)種子萌發(fā)、根系發(fā)育、氣孔關(guān)閉、防御基因的表達(dá)和程序性細(xì)胞死亡過程中起著關(guān)鍵作用。業(yè)已證實，多胺可誘導(dǎo)植物組織產(chǎn)生NO，然而誘導(dǎo)機(jī)理仍不清楚。多份研究報告指出，植物組織的多胺氧化酶在多胺誘導(dǎo)NO產(chǎn)生中有作用，然而仍缺乏相關(guān)的理化證據(jù)。

2、>　　本研究以大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細(xì)胞為材料，采用外源多胺（PAs）、多胺氧化酶抑制劑-氨基胍（AG）、哺乳動物細(xì)胞一氧化氮合酶抑制劑L-NAME、H2O2清除劑（CAT、POD）、化學(xué)性缺氧劑-連二亞硫酸鈉（SDT）及H2O2淬滅劑-二甲基硫脲（DMTU）處理，以DAF-FMDA為NO專性熒光探針，用激光共聚焦掃描顯微技術(shù)，檢測多胺誘導(dǎo)大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細(xì)胞產(chǎn)生NO的變化。結(jié)果表明：
　　（1）三種外源多胺（0.05 mM

3、腐胺、亞精胺和精胺）都可迅速地誘導(dǎo)大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細(xì)胞產(chǎn)生NO熒光，且沒有遲后期。
　?。?）在多胺孵育的同時添加NO專性清除劑0.1 mM cPTIO（2,4-羧基苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物），可強(qiáng)烈抑制細(xì)胞的 NO熒光，表明此熒光的NO特性。
　　（3）在多胺處理前用多胺氧化酶抑制劑AG孵育，可消弱細(xì)胞的NO熒光，相對應(yīng)的是細(xì)胞二胺氧化酶（CuAO）活性被強(qiáng)烈抑制；而用1.0mM L-NAM

4、E孵育細(xì)胞，細(xì)胞NO熒光可被抑制但不影響CuAO活性。
　?。?）用0.1mM CAT和0.05mM DMTU二種H2O2清除劑處理懸浮細(xì)胞，都可明顯減弱大豆懸浮細(xì)胞產(chǎn)生的NO熒光，而0.1mM POD消弱作用不明顯。
　?。?）用化學(xué)性缺氧劑SDT處理，使細(xì)胞處于厭氧狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)可明顯抑制大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細(xì)胞NO熒光產(chǎn)生，熒光強(qiáng)度隨SDT濃度的增加而下降。而SDT對NO供體硝普鈉（SNP）所誘導(dǎo)的NO熒光無明顯的抑制作