小白杏致腐拮抗菌的選育及保鮮應用研究.pdf

1、軟腐病是小白杏貯藏期間的主要侵染性病害，是造成腐爛損失的重要原因。長期以來，人們認為防治果實采后病害最有效的方法是使用化學殺菌劑，但此方法存在著農藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等諸多弊端，迫切需要新的更安全的保鮮方法來取代化學殺菌劑。微生物防治是選擇對果實以及人體不造成危害的微生物，利用微生物之間的拮抗作用，達到抑制病原菌生長的目的。
　　本研究分離鑒定出引起小白杏軟腐病的主要致病菌，針對此致病菌分離篩選出拮抗菌株BY11，并對拮

2、抗菌株進行鑒定，將拮抗菌與氯化鈣和殼聚糖進行復配，通過響應面試驗，優(yōu)選出一種復合生物保鮮劑，并驗證了其在小白杏上的保鮮效果。主要結果如下：
　　1.軟腐病病原菌的分離和鑒定：從發(fā)病果實的病健交界處取樣，分離篩選出11株菌，依據柯赫氏法則，最終得到1株引起小白杏軟腐病的主要致病菌；應用rDNA-ITS分子標記分析和傳統真菌形態(tài)學鑒定相結合的方法，鑒定致病菌株為少孢根霉（Rhizopus oryzae）。
　　2.拮抗菌的分離和

3、篩選：用稀釋平板法，從果實表面、果實傷口、葉片以及果園根際土壤中共分離得到112個菌株。應用平板對峙法，離體篩選出10株有拮抗作用的菌株。進一步通過果實接種法，活體篩選出能明顯抑制少孢根霉的拮抗菌BY11和CA4，室溫下（約25℃）抑菌率分別為79.17％和66.67%。
　　3.拮抗菌的鑒定：首先采用傳統的鑒定方法，對BY11和CA4的表型、營養(yǎng)特征和生理生化特性進行了分類鑒定，進而采用26SrDNA和16SrDNA分子鑒定方法

4、，通過同源性比對及系統發(fā)育分析，鑒定拮抗菌BY11為粘性圓紅酵母（Rhodotorula mucilaginosa），CA4為婁徹氏鏈霉菌（Streptomyces rochei）的變種。
　　4.拮抗菌BY11生長曲線的測定：采用比濁法，在600nm波長下測定菌液OD值，確定細胞濃度。研究BY11的生長曲線、最適pH、最適溫度、最佳碳源、最佳氮源。實驗得出拮抗菌BY11在培養(yǎng)48h時進入穩(wěn)定期，最適生長溫度為28℃，最適pH為6

5、，最佳碳源為蔗糖，氮源為尿素。
　　5．最佳保鮮劑的配制：將拮抗菌與氯化鈣和殼聚糖進行復配,并確定貯藏溫度。通過單因素實驗，確定復合保鮮劑和溫度的因素水平。應用響應面實驗對保鮮劑進行優(yōu)化配比，通過多元回歸分析，經失擬項和決定系數檢驗，證明模型可靠性較好。最終得出小白杏的最佳保鮮劑配方為：拮抗菌濃度為108CFU/ml，殼聚糖濃度為0.5%，氯化鈣濃度為1.5%；貯藏溫度為5℃。
　　6.保鮮劑的效果驗證：采用保鮮劑處理小白杏