膠原蛋白酶的研究進(jìn)展

1、<p>　　膠原蛋白酶的研究進(jìn)展三億文庫(kù)</p><p><b>　　設(shè)為首頁(yè)　收藏本站</b></p><p><b>　　窗體底端</b></p><p>　　首頁(yè)考試資料幻燈片工程技術(shù)公務(wù)員考試小學(xué)教學(xué)中學(xué)教學(xué)大學(xué)教學(xué)外語資料</p><p>　　36膠原蛋白酶的研究進(jìn)展</p

2、><p>　　膠原蛋白酶的研究進(jìn)展；摘要：膠原蛋白特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)使其難于被人體吸；關(guān)鍵詞：膠原蛋白酶，作用機(jī)理，影響因素；Abstract:Thenutritionala；Keywords:collagenproteas；膠原蛋白是人體內(nèi)含量最多、分布最廣泛的蛋白質(zhì)，是；加［4］［1－3］和生物活性等特性，被愈來愈多的；[5-6]抗疲勞等生理調(diào)節(jié)功能的小肽，是極具發(fā)展</p><p>　　

3、膠原蛋白酶的研究進(jìn)展</p><p>　　摘要： 膠原蛋白特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)使其難于被人體吸收，將膠原蛋白水解為膠原多肽后，可顯著提高其營(yíng)養(yǎng)及生理功能，膠原蛋白酶是一種價(jià)值很高的蛋白酶種。本文介紹了膠原蛋白酶的定義、選擇、影響因素。作用機(jī)理等，并展望其研究方向。</p><p>　　關(guān)鍵詞：膠原蛋白酶， 作用機(jī)理，影響因素</p><p>　　Abstract: T

4、he nutritional and physiological function of collagen protein can be significantly improved via chemical or enzymatichydrolysis，as the collagen protein was difficult to be absorbed by human body due to the triple helical

5、 characteristic molecules structure. Collagen protease is a kind of high value of protease. In this paper, introduces the definition of collagen enzyme, selection, influence factors, mechanism etc. The future development

6、 direction it was also prospected.</p><p>　　Key words: collagen protease, mechanism, influence factors</p><p>　　膠原蛋白是人體內(nèi)含量最多、分布最廣泛的蛋白質(zhì)，是一種與組織和器官功能密切相關(guān)的功能性蛋白。膠原蛋白的低免疫原性、生物相容性、生物降解性</p><

7、;p>　　加［4］［1 － 3］和生物活性等特性，被愈來愈多的消費(fèi)者所認(rèn)識(shí)。膠原蛋白制品已被廣泛應(yīng)用于食品、保健食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域，市場(chǎng)需求急劇增。天然膠原蛋白經(jīng)蛋白酶水解后，可得到具有抗氧化、降血壓、降血脂、免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、</p><p>　　[5-6]抗疲勞等生理調(diào)節(jié)功能的小肽，是極具發(fā)展前景的功能因子，也是當(dāng)前醫(yī)藥、食品界最熱門的研究課題之一。</p><p>　　

8、膠原蛋白具有獨(dú)特的三股超螺旋結(jié)構(gòu)，三條鏈相互平行而且由鏈間氫鍵相連，具有十分穩(wěn)定的性質(zhì)，一般的加工溫度及短時(shí)間加熱都難使其分解，因此難被人體吸收，食用利用率較低[7]。將膠原蛋白水解為膠原多肽后，其營(yíng)養(yǎng)及生理功能可顯著提高：蛋白質(zhì)消化吸收率幾乎達(dá)100％，能保護(hù)胃黏膜以及抗?jié)?，促進(jìn)皮膚膠原代謝，抑制血壓上升，對(duì)關(guān)節(jié)炎等膠原病具有很好的預(yù)防及治療作用，能促進(jìn)鈣吸收和降低血清中膽固醇含量等[8]。尋找一種高效的降解膠原蛋白的酶也成為了當(dāng)今

9、的一個(gè)熱門課題。</p><p>　　1 膠原蛋白酶的定義和選擇</p><p><b>　　1.1 定義</b></p><p>　　膠原蛋白酶(Collgaenolytci protease)定義為在適當(dāng)?shù)膒H 和溫度下，只切割活性膠原螺旋區(qū)或明膠而不作用于其他蛋白底物的酶類</p><p><b>　　1

10、.2 酶的選擇</b></p><p>　　能使膠原蛋白酶解的酶類較多。按照作用位點(diǎn)可以分為內(nèi)切酶和外切酶；從來源上可分為植物蛋白酶(如菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶等)、動(dòng)物蛋白酶（如胰蛋白酶、胃蛋白酶等）、微生物蛋白酶(如枯草桿菌1.398、放線菌166 等)；此外，較常用于水解的蛋白酶還有風(fēng)味復(fù)合酶等。在實(shí)際應(yīng)用中，酶的選取通常要考慮三個(gè)方面：一是酶對(duì)膠原蛋白作用的強(qiáng)度；二是酶的價(jià)格；三是水解產(chǎn)物的要求

11、。如果酶對(duì)膠原的作用太弱，則無法得到高的膠原水解率，而酶的純度直接影響酶的價(jià)格，純度較高的酶與工業(yè)用酶的價(jià)格往往相差甚遠(yuǎn)。因此開發(fā)的產(chǎn)品如沒有特殊要求，一般可以考慮選擇用已完全工業(yè)化的酶。除此之外，還必須考慮酶對(duì)膠原的作用位點(diǎn)，因?yàn)檫@直接影響最后水解產(chǎn)物分子量的分布，是決定能否得到目標(biāo)產(chǎn)物的一個(gè)關(guān)鍵因素</p><p>　　[12-13][9-10]。 。細(xì)菌膠原酶可分泌到胞外，通過發(fā)酵可大量獲得，微[11]生物

12、來源的膠原酶在應(yīng)用方面具有更廣的應(yīng)用范圍。</p><p>　　2 膠原蛋白酶的水解特性和作用機(jī)理的研究</p><p>　　2.1 膠原蛋白酶的水解特性</p><p>　　對(duì)于水解膠原蛋白方面的研究，國(guó)外的報(bào)道很多。例如Ruud A. Bank 等采用SDS-PAGE 決策法分別測(cè)定α-胰凝乳蛋白酶水解完整的膠原蛋白、熱處理（70℃，30min）過的變性的膠原蛋

13、白、以及用人體膠原酶解旋的膠原蛋白得到的碎片的尺寸，通過比較得出胰凝乳蛋白酶不能使完整的三股螺旋的膠原蛋白分子解鏈，但能使變性的膠原蛋白完全降解成小分子產(chǎn)物</p><p>　　在37℃經(jīng)過12h 能夠水解不能溶解的牛膠原蛋白[15][14]。。S.R.L.Teruel 研究發(fā)現(xiàn)美洲比目魚膠原蛋白酶不能水解牛膠原蛋白，魚膠原蛋白酶在pH 為7 時(shí)活性最高。天然的魚膠原蛋白酶。Masato Hiyama 等人實(shí)驗(yàn)發(fā)

14、現(xiàn)某種曲霉菌絲氨酸蛋白酶OK-22，在37℃，pH為7.5，經(jīng)過48h，Ⅰ-型膠原蛋白的水解程度達(dá)到12％。曲霉菌絲氨酸蛋白酶水解Ⅰ-型膠原蛋白的上限大約是12％，與水解乳酪的程度一樣，而真菌蛋白酶水解膠原蛋白的程度要比水解乳酪的程度弱的多[16]。Siriporn Damrongsakkul 等在用木瓜蛋白酶和應(yīng)用Neutrase 蛋白酶水解生牛皮時(shí)，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用Neutrase 蛋白酶水解的產(chǎn)物中，膠原蛋白的水解產(chǎn)物的粘度跟水一樣低。Ⅰ

15、-型的人類膠原蛋白是存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)最豐富的一種分子，天然的膠原對(duì)大多數(shù)的膠原蛋白酶都具有抵抗力[17]。J. Friedrich 等在研究角蛋白酶對(duì)天然膠原的水解能力時(shí)發(fā)現(xiàn)羽毛角蛋白和膠原不能被</p><p>　　[18]這種從菌類提取的角蛋白酶水酶。</p><p>　　曾名勇等采用正交試驗(yàn)確定了菠蘿蛋白酶和alcalase 2.4L 堿性蛋白酶這兩種酶單獨(dú)水解魚皮膠原蛋白的最佳酶

16、解條件。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行復(fù)合酶水解實(shí)驗(yàn)，表明先采用菠蘿蛋白酶水解，再用alcalase</p><p>　　2.4L蛋白酶水解，效果更佳[19]。薛勇等在研究巖藻聚糖硫酸酯寡糖-Ce(Ⅳ)配合物的制備及其對(duì)膠原蛋</p><p>　　[20]白的水解活性時(shí)發(fā)現(xiàn)小分子巖藻聚糖硫酸酯寡糖-Ce(Ⅳ)的配合效果最好，且水解膠原蛋白的活性高，并通過實(shí)驗(yàn)確定了配合條件以及配合物對(duì)膠原蛋白的最佳水解條

17、件。孫愛梅等研究認(rèn)為胰蛋白酶對(duì)</p><p>　　天然膠原蛋白幾乎沒有作用，但可以降解變性的膠原蛋白。胰蛋白酶水解膠原的最適條件是pH 為</p><p>　　8.1～8.2、溫度37℃ 。在此條件下，采用凝膠過濾色譜分析考察了酶用量時(shí)間對(duì)膠原蛋白降解過程的影響。通常情況下，在酶促</p><p>　　反應(yīng)中底物濃度比酶濃度高得多，增加酶用量對(duì)酶促反應(yīng)初始速率影響

18、較大，而且速率增加與酶用量成正比，隨著底物濃度的降低，酶用量對(duì)反應(yīng)速率的影響逐漸減小</p><p>　　件為，并對(duì)膠原水解產(chǎn)物的理化性質(zhì)進(jìn)行了測(cè)定</p><p>　　2.2 膠原蛋白酶的作用機(jī)理</p><p>　　對(duì)于酶作用機(jī)理的研究也很多。Misook Kim等利用從生姜的根莖中提取的半胱氨酸蛋白酶GP2水解從小牛皮中提取的Ⅰ-型膠原蛋白時(shí)，發(fā)現(xiàn)這種酶能作用

19、于膠原分子三條螺旋鏈上的相同位點(diǎn)，是目前唯一被證明能夠水解天然膠原的植物半胱氨酸蛋白酶[23][22][21]。陳秀金等研究了用堿性蛋白酶水解脫鉻革屑制備膠原水解產(chǎn)物時(shí)，影響膠原蛋白水解產(chǎn)物收獲率的各種因素，確定了最佳水解條。 。Yoshio Yamakawa等測(cè)定了純出血蛇毒素水解幾種白明膠和膠原蛋白的能力。但在天然膠原中只有Ⅳ-型膠原能夠被水解。出血蛇毒素對(duì)Ⅳ-型膠原的水解具有時(shí)間依賴性，在開始的2 h水解非常迅速；出血蛇毒素作用于

20、Ⅳ-型膠原不同的位點(diǎn)來水解三股螺旋結(jié)構(gòu)[24]。Magda Gioia等檢測(cè)了嗜中性粒細(xì)胞膠原蛋白酶，白明膠酶A降解膠原纖維的作用機(jī)制，通過研究Ⅰ-型膠原蛋白在37℃時(shí)水解，確定了在處理過程中兩種α-鏈膠原蛋白的功能差異。運(yùn)用熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)參數(shù)定量的比較，發(fā)現(xiàn)金屬膠原蛋白酶對(duì)對(duì)膠原蛋白分子鏈的解旋和伸展至少有兩種截然不同的機(jī)理[25]。A. Cristina Sarmento等認(rèn)為存在三種溶膠機(jī)理，一種是用裂</p>&l

21、t;p>　　[26]能夠分裂穩(wěn)定三股螺旋膠原蛋白，第二種是拓寬的精細(xì)蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶，能夠作用于天然膠原蛋白分子的分裂的肽端，第三種是細(xì)菌蛋白酶及組織蛋白酶。Eric Dufour等研究了膠原酶和組</p><p>　　織蛋白酶B水解Ⅲ-型的膠原時(shí)流體靜壓力的作用。實(shí)驗(yàn)證明高壓條件下膠原分子表面一些氨基酸側(cè)鏈不宜暴露，也不宜被組織蛋白酶B識(shí)別。膠原水解的速率隨著壓力的增大而減小。高壓會(huì)導(dǎo)致酶和底物的

22、構(gòu)象發(fā)生變化，壓力還會(huì)改變酶的彈性</p><p><b>　　[27]。</b></p><p>　　3 影響酶活力的因素</p><p>　　酶也是一種蛋白質(zhì)，凡是能使蛋白質(zhì)變性的因素，都可能使酶失去活性，如物理因素（溫度、壓力、光、磁場(chǎng)），化學(xué)因素（氧化、還原、溶劑、金屬離子、離子強(qiáng)度、pH）和生物學(xué)因素（酶修飾和酶降解）蛋白酶在加工和貯

23、存期間活力都會(huì)降低，在常溫（25℃，濕度25%）下，貯存一個(gè)月酶活力降低達(dá)20％～30%，蛋白酶的易失活特性極大地限制了其生產(chǎn)和應(yīng)用。蛋白酶的活性降低主要是由于蛋白酶的巰基易被氧化，與SO2的相互轉(zhuǎn)化，形成了醌-硫醇復(fù)合物，并可自行降解。</p><p><b>　　3.1 化學(xué)因素</b></p><p>　　3.1.1 有機(jī)溶劑</p><p&

24、gt;　　一般情況下，隨著有機(jī)溶劑濃度的增大，蛋白酶活力呈直線下降。試驗(yàn)證明，當(dāng)甲醇、乙醇、乙二醇濃度分別達(dá)到25.5%、20.5%、24.0%時(shí)，酶活力喪失一半，濃度達(dá)到50%時(shí)，酶活力完全喪失。在十二烷基硫酸鈉（SDS）變性中，菠蘿蛋白酶活力隨SDS濃度的增大而呈指數(shù)下降，而α-螺旋度開始有所下降，然后出現(xiàn)回升趨勢(shì)，SDS達(dá)4mg/ml時(shí)，酶完全失活，而α-螺旋度增加24%[28-30]。潘江球等研究報(bào)道，聚丙烯酰胺（PAAM）可使

25、蛋白酶在30、45、50、60℃下貯存后，酶活力保留率分別提高l3.8%、22.9%、25.2%、28.4%。貯存溫度越高，PAAM提高酶活力保留率的效果越明顯，PAAM在液體酶中同樣可以顯著地提高酶的穩(wěn)定性。這是因?yàn)镻AAM是一種高分子親核試劑，通過氫鍵固定在酶的表面來穩(wěn)定酶分子構(gòu)象；它對(duì)蛋白酶分子還起到一種包埋作用，有效地防止巰基的氧化失活；也由于它從酶相互作用區(qū)域排除水，降低自由能，使酶的貯存穩(wěn)定性得到了顯著的提 高</p&

26、gt;<p>　　3.1.2 金屬離子</p><p>　　在pH7.0時(shí)，草酸鈉對(duì)蛋白酶有明顯穩(wěn)定作用，100mmol/L草酸鈉能使酶活半衰期延長(zhǎng)6倍，丁二酸鈉、酒石酸甲鈉對(duì)酶活也有一定的保護(hù)作用。醋酸鈉、檸檬酸鈉、硼酸鈉對(duì)蛋白酶都有一定程度的保護(hù)作用，并且濃度變化對(duì)保護(hù)作用的影響不大。研究證明，添加苯甲酸鈉，貯存1個(gè)月后酶活力比對(duì)照組提高14％。添加焦亞硫酸鈉，在15℃下避光保存2個(gè)月酶活力保持

27、不變。Ca2 +和Zn2 +對(duì)蛋白酶有一定程度的保護(hù)作用。KCl和NaCl對(duì)蛋白酶熱穩(wěn)定性基本沒有影響[32][31]。 ；CaCl2和MgCl2在一定濃度下顯現(xiàn)出一定的保護(hù)作用，分別比對(duì)照品提高了21%和12.4%。Zn（Ac)2和ZnCl2在低濃度下就可增進(jìn)酶的熱穩(wěn)定性，在合適的濃度下，酶活力分別比對(duì)照品提高了32.4%和29.1%。在這些金屬離子中，發(fā)現(xiàn)對(duì)蛋白酶有一定作用的都是二價(jià)離子，以鋅離子的作用較為明顯，鈣、鎂離子次之。而對(duì)

28、于鋅離子，醋酸鋅的功效顯得更大些，它能以極低的濃度（5×10-4mol/L）獲得顯著的穩(wěn)定效果。</p><p><b>　　3.1.3 共溶劑</b></p><p>　　糖類、多元醇、氨基酸及其衍生物、無機(jī)鹽、甘油、多聚物如聚乙二醇（PEG）等一般被稱為蛋白質(zhì)的共溶劑。對(duì)某一活性酶來說，其酶失活半衰期是常數(shù)，因此可以菠蘿蛋白酶失活半衰期用作衡量酶熱穩(wěn)定性

29、的指標(biāo)。研究證明，40％半乳糖對(duì)菠蘿蛋白酶有一定的保護(hù)作用，能使其酶活半衰期提高3倍；50％葡萄糖可將菠蘿蛋白酶的半衰期延長(zhǎng)10倍，但有研究指出，葡聚糖和肌醇對(duì)該蛋白酶沒有保護(hù)作用。蔗糖、麥芽糖、棉子糖和松三糖等寡糖對(duì)菠蘿蛋白酶均有明顯的保護(hù)作用。也有人證明，低濃度的蔗糖、葡萄糖、β-環(huán)糊精、黃原膠對(duì)提高酶的熱穩(wěn)定性沒有作用。50％甘油可將菠蘿蛋白酶的半衰期延長(zhǎng)8倍，乙二醇和甘露醇對(duì)菠蘿蛋白酶有一定的保護(hù)作用</p>&l

30、t;p>　　甘露醇即使在低濃度下也能促進(jìn)酶溶液的熱穩(wěn)定性。</p><p>　　近幾年的研究表明，共溶劑對(duì)酶的保護(hù)作用機(jī)制是共溶劑的加入改變了溶液的熱力學(xué)性質(zhì)，使酶的穩(wěn)定性得到增強(qiáng)，理論上稱優(yōu)先排阻作用。共溶劑從酶表面的優(yōu)先排阻并不是說共溶劑分子絕對(duì)不能滲透到酶表面并與之結(jié)合，而是在酶表面完全水化和共溶劑完全結(jié)合之間建立起一種平衡。糖類是酶蛋白在溶液中和在干燥狀態(tài)下較好的穩(wěn)定劑。甘油和多元醇對(duì)酶的非極性表面

31、有</p><p>　　很好的穩(wěn)定作用。另外，一些研究者發(fā)現(xiàn)，混合使用共溶劑可大大提高酶的穩(wěn)定效果。</p><p>　　[33]。試驗(yàn)還證明，多元醇甘油、</p><p><b>　　3.2 物理因素</b></p><p>　　3.2.1 溫度和濕度</p><p>　　一般動(dòng)物蛋白酶的最適反

32、應(yīng)溫度介于37～40℃，植物蛋白酶的最適為50～60℃，溫度升高，酶的熱失活增強(qiáng)，反應(yīng)速度下降。</p><p>　　在干燥環(huán)境下，蛋白酶活力相對(duì)穩(wěn)定，但隨著環(huán)境濕度的增大，酶失活速率加快</p><p><b>　　3.2.2 光照</b></p><p>　　光對(duì)蛋白酶活性的影響是明顯的。試驗(yàn)證明，將菠蘿蛋白酶進(jìn)行避光和無避光貯存10d后，

33、無避光下酶活力的保留率比避光下降低了9.8%。這是因?yàn)榈鞍酌钢械膸€基、氨基、色氨酸殘基和唯一的組氨酸殘基是酶活性的必需基團(tuán)，日光對(duì)這些基團(tuán)的破壞性很強(qiáng)，日光中的紫外線等可以引起酶構(gòu)象的改變或使酶的氨基酸殘基氧化、引起共價(jià)鍵斷裂等反應(yīng)</p><p><b>　　3.3 生物因素</b></p><p>　　Lee等報(bào)道，用脂質(zhì)膜微膠囊包埋保護(hù)蛋白酶，能有效地提高蛋白酶

34、的穩(wěn)定性[36]。據(jù)黃惠華等報(bào)道，以聚乙二醇為分散劑和穩(wěn)定劑，用氧化低價(jià)鐵鹽的方法制成具有磁性響應(yīng)性的微球，用1.33%濃度的該磁性微球吸附分離的蛋白酶，回收率達(dá)61.96%，酶活性為3.8萬單位/g，固定化磁性蛋白酶的熱穩(wěn)定性有顯著提高，常溫下的保存半衰期為28d左右[37][35][34]。 。 。用琥珀酸酐法活化后的聚乙二醇（PEG）修飾蛋白酶，所得到的修飾酶在對(duì)溫度和pH值的穩(wěn)定性上均比天然酶有一定程度的提高。這說明PEG分子對(duì)

35、酶有一定的保護(hù)作用，推測(cè)這種作用應(yīng)來自分子間的作用力。Mg2+和Ca2+對(duì)修飾酶有不同程度的激活作用，而Na+對(duì)修飾酶無明顯影響[38]。以脫乙酰甲殼質(zhì)為載體，戊二醛為交聯(lián)劑，對(duì)蛋白酶進(jìn)行固定化，研究其對(duì)啤酒澄清的作用。采用右旋糖醛對(duì)蛋白酶進(jìn)行化學(xué)修飾，經(jīng)修飾的酶能較好地保持蛋白酶活性，并且具有更好的穩(wěn)定性。</p><p>　　4 膠原蛋白酶的提取方法</p><p>　　蛋白酶的提取方

36、法有很多種：沉淀法、層析法、膜超濾法，提取膠原蛋白主要用的的是層析法。</p><p><b>　　4.1 層析法</b></p><p>　　層析法又稱為色譜法。在層析分離中基于固定相和流動(dòng)相中各組份阻滯能力的作用不同，又可分為分子篩層析、離子層析、親和層析等。</p><p>　　4.1.1 分子篩層析</p><p&g

37、t;　　分子篩層析( gel chromatography) 又稱為凝膠層析或凝膠過濾。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相，對(duì)混合物中各組分按分子大小進(jìn)行分離的層析技術(shù)，適用于分離和提純蛋白質(zhì)、酶、多肽、激素、多糖、核酸類等物質(zhì)。分子大小彼此相差25%的樣品，只要通過單一凝膠床就可以完全將它們分開。具有分子篩作用的物質(zhì)很多，如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等，以葡聚糖凝膠應(yīng)用最廣。分子篩層析具有設(shè)備

38、簡(jiǎn)單、操作方便、分離迅速及不影響分子生物學(xué)活性等優(yōu)點(diǎn)，目前已被廣泛應(yīng)用于各種生化產(chǎn)品的分離和純化。但同時(shí)也存在分辨率不高，分離操作較慢等不足之處。此外，凝膠層析要求樣品黏度不宜太高，凝膠顆粒有時(shí)還有非特異吸附現(xiàn)象。</p><p>　　4.1.2 離子交換層析</p><p>　　離子交換層析( Ion Exchange Chromatography 簡(jiǎn)稱為IEC) 是以離子交換劑為固定相

39、，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。離子交換層析中，基質(zhì)是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。由于蛋白質(zhì)也帶有電荷，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于不同的pH 條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì)，反之陽(yáng)離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì)。通過提高洗脫液中的</p><p>　　鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質(zhì)洗脫下來。結(jié)合較弱的蛋白質(zhì)首先被洗

40、脫下來。與分子篩層析相比，離子交換層析特異性更好，有更多的參數(shù)可以調(diào)整以獲得最優(yōu)的純化效果，樹脂也比較便</p><p>　　宜。值得一提的是，即便是用最精確控制的條件，僅用離子交換單一的方法也得不到純的蛋白質(zhì)，還需要其他的純化步驟并需要經(jīng)常進(jìn)行離子再生，耗費(fèi)大量酸堿，而且對(duì)環(huán)境有一定的破壞。</p><p><b>　　5 發(fā)展前景</b></p>&

41、lt;p>　　我國(guó)是工業(yè)生產(chǎn)大國(guó)之一，每年產(chǎn)生30萬噸以上的鞣革廢渣，利用這些工業(yè)廢棄物的酶解來制備膠原多肽，使其變廢為寶，不僅減少環(huán)境污染，還能帶來良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。但是由于酶自身的缺點(diǎn)，如高度的底物專一性，易變敏感性，水解率偏低等，導(dǎo)致工業(yè)化生產(chǎn)的成本較高，產(chǎn)品價(jià)格昂貴。所以尋找穩(wěn)定性，產(chǎn)量高好的膠原蛋白酶，改進(jìn)各種水解工藝條件，提高膠原蛋白酶解為膠原多肽的酶解效率，將成為水解膠原蛋白領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。</p>

42、;<p>　　三億文庫(kù)3y.uu456.com包含各類專業(yè)文獻(xiàn)、外語學(xué)習(xí)資料、行業(yè)資料、專業(yè)論文、中學(xué)教育、幼兒教育、小學(xué)教育、文學(xué)作品欣賞、36膠原蛋白酶的研究進(jìn)展等內(nèi)容。</p><p><b>　　12</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1]石崗.生物活性肽進(jìn)

43、展［J］.北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，；[2]陳國(guó)梁，賀翠蓮.膠原蛋白的研究進(jìn)展［J］.；[3]焦駝文，孔繁東，等.酶解蛋白制備抗氧化多肽；[4]馮成利，黨蕊葉，李校坤，等.豬皮膠原蛋白肽；[5]曹榮安，李浩，李良玉，等.膠原蛋白的生理功；[6]傅燕鳳，沈月新.淺談魚皮膠原蛋白的利用［J；[7]S.R.Fahnestock,A.Stei</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p>

44、<p>　　[1]石崗. 生物活性肽進(jìn)展［J］ . 北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002 ( 3 ) :9 － 13.</p><p>　　[2]陳國(guó)梁，賀翠蓮. 膠原蛋白的研究進(jìn)展［J］. 延安大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版，2000，19 (2) : 78 － 81.</p><p>　　[3] 焦駝文，孔繁東，等. 酶解蛋白制備抗氧化多肽的研究現(xiàn)狀與展望［J］. 中國(guó)釀造，2007 (3) :

45、 5 － 7.</p><p>　　[4] 馮成利，黨蕊葉，李校坤， 等. 豬皮膠原蛋白肽的提取及理化分析［J］. 陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版，2007，35: 20 － 23.</p><p>　　[5]曹榮安，李浩，李良玉， 等. 膠原蛋白的生理功能特性及其應(yīng)用［J］. 肉制品加工與設(shè)備，2010 (1) : 7 － 9.</p><p>　　[6]傅燕鳳，

46、沈月新. 淺談魚皮膠原蛋白的利用［J］. 食品研究與開發(fā)，2004，25 (2) : 16 － 18.</p><p>　　[7] S.R.Fahnestock, A.Steinbüchel.Biopolymers(8):Polyamidesand ComplexProteinaceousMaterials[M],2005.</p><p>　　[8] Piez K A,Eign

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50、t;/p><p>　　[12] Kanth SV, Venba R, Madhan B, et al. Studies on the influence of bacterial collagenase in leather dyeing. Dyes Pigm, 2008, 76(2): 338–347.</p><p>　　[12]蔣挺大,張春萍.膠原蛋白[M].化學(xué)工業(yè)出版社,2001&l

51、t;/p><p>　　[13] 菅景穎,張志勝.酶解膠原蛋白研究進(jìn)展[J].浙江化工,2007, 38(1):18-20</p><p>　　[14] Ruud A.Bank,Marianne Krikken,Bob Beekman et al.A simplefied mesurement of degraded collagen in tissues: application in<

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53、winter flounder</p><p>　　(Pseudopleuronectes americanus)[J].Comp. Biochem. Physiol.1995,lI2B(1):131-136.</p><p>　　[16] Masato Hiyama,Masaaki Shinozuka,Masaru Iizuka et al.Degradation of Gelatin

54、and Collagen by Serine Proteinase of Aspergillus</p><p>　　sydowi[J]. Journal of Fermentation And Bioengineering,1996,81(5):464-465.</p><p>　　[17] Siriporn Damrongsakkul,Kongpob Ratanathammapan,

55、Kittinan Komolpis et al. Enzymatic hydrolysis of rawhide using papain and neutrase[J].Journal of Industrial and Engineering Chemistry,2008,(14):202-206.</p><p>　　[18] J. Friedrich, S. Kern. Hydrolysis of nat

56、ive proteins by keratinolytic protease of Doratomyces microsporus [J].Journalof Molecular</p><p>　　Catalysis B: Enzymatic,2003, (21):35-37.</p><p>　　[19]曾名勇,李八方,陳勝軍等.紅非鯽魚皮膠原蛋白酶解條件的研究[J].中國(guó)海洋藥物雜志

57、.2005, 24(5):24-29.</p><p>　　[20] 薛勇,薛長(zhǎng)湖,杜世振等.巖藻聚糖硫酸酯寡糖-Ce(Ⅳ)配合物水解膠原蛋白的研究[J].中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2006, 36(2):273-276.</p><p>　　[21] 孫愛梅，張貴鋒，倪文等.膠原蛋白講解物高效液相色譜/質(zhì)譜連用分析[J].中國(guó)生物工程雜志.2005,25（2）:66-72.</p>

58、<p>　　[22]陳秀金,曹健,魏明等.堿性蛋白酶水解脫鉻革屑制備膠原 水解物的研究[J].中國(guó)皮革,2004,33(1):42-46.</p><p>　　[23] Misook Kim,Susan E.Hamilton,Luke W.Guddat et al.Plant collagenase:Unique collagenolytic activity of cysteine protease

59、s from ginger[J].Biochimica et BiophysicaActa, 2007, (1770): 1627-1635.</p><p>　　[24] Magda Gioia,Susanna Monaco,Giovanni Francesco et al. Characterization of the Mechanisms by which Gelatinase A,Neutrophil

60、Collagenase,,and Membrane-Type Metalloproteinase MMP-14 Recognize Collagen I and Enzymatically Process the Two α-Chains[J]. J. Mol. Biol, 2007,(368):1101-1113.</p><p>　　[25] Yoshio Yamakawa ,Tamotsu Omori-Sa

61、thoa, Dietrich Mebs. Hemorrhagic principles in the enom of Bitis arietans,a viperous snake.II. Enzymatic', properties with special reference to substrate specificity[J].Biochimica et Biophysica Acta,1995,(1247):17-23

62、.</p><p>　　[26] A.Cristina Sarmento ,Cl′audia S. Oliveira,Ana S.Duarte et al. Evaluation of cardosin A as a probe for limited proteolysisin non-aqueous environments-complex substrates hydrolysis[J].Enzyme an

63、d Microbial Technology,2006,(38):415-421.</p><p>　　[27] Eric Dufour,Michèle Dalgalarrondo,Guy Hervé et al. Proteolysis of Type III Collagen by Collagenase and</p><p>　　[28]Cathepsin B

64、Under High Hydrostatic Pressure[J].Meat Science.1996,42, (3):261-269.陳清西，顏思旭. 果菠蘿蛋白酶的分子構(gòu)象與活力變化的研究. 生物化學(xué)雜志， 1991， 7 （3）：301-306.</p><p>　　[29]陳清西，顏思旭. 果菠蘿蛋白酶在胍和SDS 變性時(shí)的酶活力與構(gòu)象變化研究. 生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào)， 1992，24（5）：476-

65、482.</p><p>　　[30] 陳清西， 顏思旭. 果菠蘿蛋白酶在有機(jī)溶劑微擾時(shí)的分子折疊與活力變化的研究. 高等化學(xué)學(xué)報(bào)， 1993， 14（3）：424-427.</p><p>　　[31] 潘江球， 劉堅(jiān)， 李思東， 等. Polyacrylamide對(duì)菠蘿蛋白酶活力的穩(wěn)定作用. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2002， 23（4）：29-31.</p><p>

66、　　[32] 章佩芬， 陳敏華， 郭利平. 菠蘿蛋白酶應(yīng)用的性質(zhì)研究.廣州食品工業(yè)科技， 2002， 18（2）：16-18.</p><p>　　[33] 李興，林哲甫. 多元醇和糖類對(duì)菠蘿蛋白酶熱穩(wěn)定性的影響. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志， 2001，14（4）：243-244.</p><p>　　[34]章佩芬，郭勇. 菠蘿蛋白酶的保存穩(wěn)定性研究. 藥物生物技術(shù)， 2002， 9（3）：1

67、63-164.</p><p>　　[35] 潘江球. 影響菠蘿蛋白酶活力主要因素的研究. 華南熱 帶農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2003.</p><p>　　[36]Lee DH， Jin BH， Hwang YI， Lee SC. Encapsulationof bromelain in liposome. Journal of food science and nutrition， 20

68、00， 5（2）：81-85.</p><p>　　[37] 黃惠華，高孔榮.磁性載體對(duì)菠蘿蛋白酶吸附分離和固 定化的研究.食品科學(xué)，1996，17（10）：3-8.</p><p>　　[38] 田國(guó)賀，郭佳宓，呂團(tuán)偉，等.聚乙二醇對(duì)菠蘿蛋白酶的化學(xué)修飾. 生物技術(shù)， 2006， 16（1）：35-38.</p><p>　　三億文庫(kù)3y.uu456.com包含各

69、類專業(yè)文獻(xiàn)、外語學(xué)習(xí)資料、行業(yè)資料、專業(yè)論文、中學(xué)教育、幼兒教育、小學(xué)教育、文學(xué)作品欣賞、36膠原蛋白酶的研究進(jìn)展等內(nèi)容。</p><p><b>　　12</b></p><p>　　下載地址：36膠原蛋白酶的研究進(jìn)展.Doc</p><p><b>　　【Top】</b></p><p><

70、;b>　　最新搜索</b></p><p>　　膠原蛋白酶的研究進(jìn)展</p><p>　　注冊(cè)電氣工程師基礎(chǔ)-涵蓋所有數(shù)學(xué)基礎(chǔ)(微分、積分、級(jí)數(shù)、求導(dǎo)</p><p>　　劃分產(chǎn)品成本和期間成本,是為了貫徹配比原則。</p><p>　　季節(jié)性保養(yǎng) (FILEminimizer)</p><p>　　

71、論孔子平等教育思想對(duì)幼兒園生活活動(dòng)組織的意義</p><p>　　江西省贛州市2015中考數(shù)學(xué)適應(yīng)性考試試卷</p><p>　　EC-PC87541筆記本的上電時(shí)序(圖)</p><p>　　黑龍江哈師大附中11—12學(xué)年下學(xué)期高二4月月考生物</p><p><b>　　水池蓄水試驗(yàn)記錄</b></p>

72、<p><b>　　桂林金盤電氣</b></p><p>　　2015-2020年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)分析及發(fā)展方向研究報(bào)告 </p><p>　　2015-2020年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)分析及發(fā)展方向研究報(bào)告_調(diào)查/報(bào)告_表格/模板_實(shí)用文檔。2015-2020年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)分析及發(fā)展方向研究報(bào)告2015...</p><p>

73、　　膠原蛋白的研究進(jìn)展 </p><p>　　膠原蛋白研究進(jìn)展 *:通訊作者.23465145378@qq.com 摘要: 膠原蛋白以其獨(dú)特的生物...的膠原蛋白制品的目的. 井原等[3]采用酸法對(duì) 膠原蛋白進(jìn)行提取,再用蛋白酶...</p><p>　　2015年中國(guó)膠原蛋白酶產(chǎn)業(yè)深度調(diào)研報(bào)告 </p><p>　　2015-2020 年中國(guó)膠原蛋白酶產(chǎn)業(yè)深 度調(diào)

74、研及市場(chǎng)前景預(yù)測(cè)報(bào)告 中國(guó)產(chǎn)業(yè)信息網(wǎng) 什么是行業(yè)研究報(bào)告行業(yè)研究是通過深入研究某一行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)、規(guī)模結(jié)構(gòu)、競(jìng)爭(zhēng)格局以及綜合...</p><p>　　2015-2020年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)分析及發(fā)展戰(zhàn)略研究報(bào)告 </p><p>　　2015-2020年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)分析及發(fā)展戰(zhàn)略研究報(bào)告_經(jīng)濟(jì)/市場(chǎng)_經(jīng)管營(yíng)銷_專業(yè)資料。膠原蛋白酶行業(yè)分析及發(fā)展戰(zhàn)略研究報(bào)告2015-2020 年中國(guó)膠

75、原蛋白酶行業(yè)分 析及...</p><p>　　木瓜蛋白酶的研究進(jìn)展 </p><p>　　木瓜蛋白酶的研究進(jìn)展_生物學(xué)_自然科學(xué)_專業(yè)資料。木瓜蛋白酶研究進(jìn)展的論文木瓜...它將肌動(dòng)球蛋白和膠原蛋 白降解成小分子的多肽甚至氨基酸,令其肌絲和筋腱絲斷裂...</p><p>　　2015-2020年中國(guó)膠原蛋白酶市場(chǎng)行情動(dòng)態(tài)及投資風(fēng)險(xiǎn)報(bào)告 </p>&

76、lt;p>　　2015-2020 年中國(guó)膠原蛋白酶市場(chǎng)行 情動(dòng)態(tài)及投資風(fēng)險(xiǎn)報(bào)告 凱德產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)研究中心 www.cnkaide.com 行業(yè)研究報(bào)告的定義行業(yè)研究是通過深入研究某一行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)、規(guī)模...</p><p>　　木瓜蛋白酶的提取及應(yīng)用研究進(jìn)展 </p><p>　　木瓜蛋白酶的提取及應(yīng)用研究進(jìn)展_能源/化工_工程科技_專業(yè)資料。木瓜蛋白酶的提取...它將肌動(dòng)球蛋白和膠原蛋

77、白降解成小分子的多肽甚至氨基酸,令其肌絲和 筋腱絲斷裂...</p><p>　　2015年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)投資前景預(yù)測(cè)報(bào)告 </p><p>　　2015-2020 年中國(guó)膠原蛋白酶行業(yè)市 場(chǎng)運(yùn)行態(tài)勢(shì)及投資前景預(yù)測(cè)報(bào)告 中國(guó)產(chǎn)業(yè)信息網(wǎng) 什么是行業(yè)研究報(bào)告行業(yè)研究是通過深入研究某一行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)、規(guī)模結(jié)構(gòu)、競(jìng)爭(zhēng)格局以及...</p><p>　　2014-2019年

78、中國(guó)膠原蛋白行業(yè)深度調(diào)研與投資前景預(yù)測(cè)報(bào)告 </p><p>　　膠原蛋白 什么是行業(yè)研究報(bào)告行業(yè)研究是通過深入研究某一行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)、規(guī)模結(jié)構(gòu)、...酶解生物活性膠原蛋白發(fā)展前景看好 二、膠原蛋白應(yīng)用前景廣闊 三、膠原蛋白/聚...</p><p><b>　　熱點(diǎn)推薦</b></p><p>　　果蔬種植培訓(xùn)實(shí)施方案</p>&

79、lt;p>　　37唯科學(xué)的西方馬克思主義歷史觀評(píng)析</p><p>　　生態(tài)文明建設(shè)的重要性以及大學(xué)生應(yīng)該怎么做10</p><p><b>　　環(huán)安衛(wèi)</b></p><p>　　第四章 果蔬加工原料的常用品種60</p><p>　　6-4珍愛生命 拒絕毒品</p><p><b&

80、gt;　　32藥品購(gòu)銷合同</b></p><p>　　58消防噴淋頭種類及介紹</p><p>　　52數(shù)字電路與邏輯設(shè)計(jì)試題及答案(試卷C)</p><p>　　關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)職工學(xué)習(xí)實(shí)施意見</p><p><b>　　窗體頂端</b></p><p><b>　　窗體