硫酸頭孢喹肟注射液的研制及其初步應(yīng)用.pdf

1、硫酸頭孢喹肟(Cefquinome Sulfate)由德國(guó)赫斯特公司(Hoechst AG)于二十世紀(jì)八十年代初開(kāi)發(fā)的第四代動(dòng)物專用頭孢類抗生素,并于1993年首次批準(zhǔn)上市。硫酸頭孢喹肟具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、藥代動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)良及毒副作用低等優(yōu)點(diǎn),已在歐洲、南美洲等開(kāi)始用于獸醫(yī)臨床防治豬和牛的細(xì)菌感染性疾病。本項(xiàng)目依據(jù)《中華人民共和國(guó)獸藥典》一部附錄對(duì)“混懸型注射液”的規(guī)定,研制了硫酸頭孢喹肟混懸注射液,并通過(guò)對(duì)該制劑的質(zhì)量控制及穩(wěn)定

2、性、生物等效性、臨床應(yīng)用、殘留消除規(guī)律等方面的研究,以期獲得一種能和進(jìn)口頭孢喹肟具有同等生物效應(yīng)的注射液,并最終能在我國(guó)獸醫(yī)臨床推廣使用。
　　 1、硫酸頭孢喹肟注射液的研制
　　 根據(jù)硫酸頭孢喹肟的理化性質(zhì),進(jìn)行了硫酸頭孢喹肟注射液(2.5％)處方篩選和制劑生產(chǎn)工藝的研究。確定了制備硫酸頭孢喹肟注射液時(shí)所用原料藥的超微粉碎粒度、注射級(jí)大豆油溶媒及無(wú)菌充氮條件下混懸制備優(yōu)化工藝;通過(guò)溫度、光照對(duì)該混懸注射液的穩(wěn)定性影響試

3、驗(yàn),建立了該制劑無(wú)菌制備工藝技術(shù)和20℃以下避光保存的貯藏條件。
　　 2、質(zhì)量考察及穩(wěn)定性、肌注刺激性試驗(yàn)
　　 通過(guò)性狀監(jiān)測(cè)、光照試驗(yàn)、分散性試驗(yàn)、沉降試驗(yàn),判定硫酸頭孢喹肟注射液為微細(xì)顆粒的混懸油溶液,久置分層,振搖后成均勻的類白色至淡黃色混懸液;經(jīng)紫外-可見(jiàn)分光光度法掃描確定,頭孢喹肟在265nm±2nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。根據(jù)頭孢喹肟在堿性條件下與羥胺作用生成的羥肟酸,在稀酸中能與高鐵離子發(fā)生顯色反應(yīng)、硫酸鹽與

4、氯化鋇試液能生成白色硫酸鋇沉淀,以及液相色譜法測(cè)定供試品溶液主峰的保留時(shí)間(tR)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間(tR)等,建立了硫酸頭孢喹肟注射液可用顯色法、沉淀反應(yīng)和液相色譜法進(jìn)行鑒別。
　　 建立了硫酸頭孢喹肟注射液中硫酸頭孢喹肟含量測(cè)定的高效液相色譜法(HPLC)。色譜條件:色譜柱為Alltech alltima C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),柱溫25℃,流動(dòng)相為高氯酸鈉-磷酸-乙腈(500:6:57,pH3

5、.5±0.1),流速為1.0mL/min,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為269 nm,進(jìn)樣量20μL。結(jié)果顯示硫酸頭孢喹肟在11.78～235.6μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998),平均回收率為99.70％,RSD為0.435％。
　　 將三批硫酸頭孢喹肟注射液,分別進(jìn)行加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn),通過(guò)測(cè)定外觀性狀、分解產(chǎn)物和含量等各項(xiàng)指標(biāo),與0時(shí)進(jìn)行比較。結(jié)果表明,硫酸頭孢喹肟注射液在40±2℃條件下放置6個(gè)月時(shí),外觀色澤加深;液相檢

6、查,總雜質(zhì)均已超過(guò)4％,在30±2℃條件下放置6個(gè)月時(shí),外觀色澤稍加深;液相檢查,2,3-環(huán)已基吡啶峰、其他單個(gè)最大峰、總雜質(zhì)峰均未超標(biāo),含量也在合格范圍,在涼暗處貯存18個(gè)月后,有關(guān)物質(zhì)逐漸增加,但仍未超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限度。
　　 試驗(yàn)選用4只健康家兔,分兩組進(jìn)行刺激性試驗(yàn)。第一組2只家兔在四頭肌處肌注頭孢喹肟混懸注射液后48小時(shí)內(nèi),食欲與飲欲稍有下降,四肢外觀無(wú)明顯變化,剖檢發(fā)現(xiàn)股四頭肌為輕度出血,且有散在出血點(diǎn),但無(wú)肌肉變性

7、現(xiàn)象;第二組2只家兔注射后7天內(nèi),食欲與飲欲無(wú)明顯下降,四肢外觀無(wú)明顯變化,7天后解剖檢查表明,股四頭肌基本不出血,無(wú)肌肉變性現(xiàn)象。試驗(yàn)表明供試品的局部試驗(yàn)對(duì)動(dòng)物肌肉的刺激性較弱。
　　 3、在豬體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)生物等效性試驗(yàn)及殘留消除試驗(yàn)
　　 試驗(yàn)對(duì)所研制的硫酸頭孢喹肟注射液(2.5％)進(jìn)行了豬體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)生物等效性試驗(yàn),藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程表現(xiàn)為二室開(kāi)放模型。與參照組比較,受試組吸收較慢,達(dá)峰時(shí)間較長(zhǎng),消除較緩慢。受試組

8、AUC90％置信區(qū)間為104.1％-120.0％,在參照組均值的80％-120％范圍內(nèi);Cmax90％置信區(qū)間為99.6％-116.7％,在參照組均值的70％-130％范圍內(nèi)。表明受試品和參照品個(gè)體間、周期間和劑型間符合生物等效性的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,為生物等效制劑。
　　 建立了豬組織中頭孢喹肟的固相萃取.高效液相色譜(SPE-HPLC)測(cè)定方法,并對(duì)硫酸頭孢喹肟注射液在豬體內(nèi)的殘留消除規(guī)律進(jìn)行了研究。組織樣品中頭孢喹肟殘留采用磷酸鹽

9、緩沖液和乙腈提取,C18固相萃取小柱凈化,磷酸鹽緩沖液淋洗、乙腈溶液洗脫。頭孢喹肟含量采用高效液相色譜紫外檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。測(cè)定方法的LOD(檢測(cè)限)和LOQ(定量限)分別為5～30 ng/g和20～100 ng/g。在0.02～2.0μg/g添加范圍內(nèi),平均回收率55.7％～79.4％,變異系數(shù)低于6.7％。建立的豬組織中頭孢喹肟殘留測(cè)定的技術(shù)參數(shù)能滿足豬組織中頭孢喹肟殘留測(cè)定要求。
　　 健康豬按2mg/kg劑量肌肉注

10、射2.5％頭孢喹肟注射液,每日1次,連續(xù)5 d,最后一次給藥后0.5、1、2、3、5、7、9 d分別宰殺5頭豬,采集肌肉、脂肪、肝臟和腎臟,測(cè)定組織中頭孢喹肟殘留量。頭孢喹肟主要?dú)埩粲谪i的腎臟和肝臟,脂肪和肌肉中殘留較少,提示腎臟和肝臟為頭孢喹肟在豬體內(nèi)殘留的靶組織。停藥3d后,所有組織中藥物殘留量均低于EMEA規(guī)定最高殘留限量(MRLs)。研究結(jié)果表明,硫酸頭孢喹肟在豬組織中消除迅速。建議休藥期為3 d。
　　 4、治療奶牛大

11、腸桿菌性乳房炎試驗(yàn)及在泌乳奶牛的牛奶中殘留消除試驗(yàn)
　　 試驗(yàn)選取了24頭大腸桿菌性顯性乳房炎病牛,一組肌肉注射頭孢喹肟混懸注射劑作治療試驗(yàn)組,另一組肌肉注射氨芐西林鈉作藥物對(duì)照組,結(jié)果表明,硫酸頭孢喹肟混懸注射劑與注射用氨芐西林鈉對(duì)奶牛大腸桿菌性乳房炎均有較好的治療效果,在控制病程和產(chǎn)奶量方面頭孢喹肟混懸注射劑明顯優(yōu)于注射用氨芐西林鈉,肌肉注射硫酸頭孢喹肟混懸注射劑1 mg/kg.bw,其臨床治愈率可達(dá)90％以上,細(xì)菌學(xué)治愈率

12、可達(dá)80％以上。
　　 建立了頭孢喹肟在牛奶中殘留的高效液相色譜檢測(cè)方法。牛奶中頭孢喹肟殘留采用乙腈提取,提取液旋轉(zhuǎn)蒸干,殘留物用流動(dòng)相復(fù)溶,進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定。流動(dòng)相為醋酸.醋酸鈉緩沖液:甲醇(83:17,v/v),紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。檢測(cè)結(jié)果表明,頭孢喹肟在0.02～2μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性相關(guān)(R2≥0.9997)。在0.02μg/mL、1μg/mL、2μg/mL的添加水平上,頭孢喹肟在牛奶中的平均回收率為8

13、5.28％～98.56％,日內(nèi)和日間變異系數(shù)分別為1.55％～4.36％、0.40％～2.01％,最低檢出限為0.01μg/mL,定量限為0.02μg/mL。
　　 試驗(yàn)選擇4頭處于泌乳期的健康荷斯坦奶牛,試驗(yàn)前未使用過(guò)頭孢喹肟。硫酸頭孢喹肟混懸劑按推薦劑量于奶牛頸部肌內(nèi)注射,1次/d,連用2日。停藥后按預(yù)定時(shí)間點(diǎn)(0.5、12、24、36、48、60、72、84、96、108h)采集奶樣。利用建立的牛奶中頭孢喹肟殘留檢測(cè)高效液