大豆疫霉磷脂酰肌醇轉移蛋白PsPITP1功能分析.pdf

1、大豆疫霉（Phytophthorasojae）侵染大豆可引起幼苗猝死和成株的根腐病。自1948年在美國首次被發(fā)現以來，大豆疫霉根腐病已成為世界大豆生產上的主要病害之一，每年給大豆產業(yè)帶來巨額經濟損失。因此研究和探討大豆疫霉的侵染及致病機制，對大豆生產及大豆疫霉病害的防治非常關鍵。近年來隨著分子生物學及生物信息學的迅速發(fā)展，卵菌的遺傳轉化技術不斷成熟與完善，尤其是大豆疫霉等幾個疫霉種基因組序列測序完成后，以外泌蛋白為突破口的卵菌致病機制的

2、研究取得了長足進展。而RNAi技術的成熟則為基因功能研究開拓了另一條途徑，本實驗將RNAi技術應用于大豆疫霉的功能基因組研究中，研究外泌相關蛋白PsPITP1的功能及其在侵染過程中所起的作用。
　　大豆疫霉磷脂酰肌醇轉移蛋白PsPITP1的生物學預測及轉錄分析.PITP普遍存在于真核生物細胞中，能夠結合并交換一分子的磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)或磷脂酰膽堿phosphatidylcholine，PC

3、)，并促進這兩類脂分子在細胞內膜組分間的轉移。PITP對細胞內膜組分間脂類的運輸和代謝、分泌囊泡的形成和運輸、磷脂酶C(phospholipase，PLC)調節(jié)的信號傳導等生理生化過程具有重要的影響。本研究通過生物信息學方法從大豆疫霉全基因組數據庫中挖掘出了一個PITP基因，分別命名為PsPITP1，通過與其它真核生物的同源性比對，發(fā)現其高度保守。利用RNA-sequencing和qRT-PCR等技術分析了PsPITP1在生活史及侵染各

4、階段的轉錄情況，發(fā)現其在侵染階段高度上調表達，推測可能參與侵染過程。
　　PsPITP1參與調控大豆疫霉的生長發(fā)育和致病性.利用PEG-CaCl2介導的大豆疫霉遺傳轉化技術得到三個PsPITP1沉默突變體。表型分析表明:PsPITP1沉默突變體的生長速率下降，菌落形態(tài)異常，休止孢萌發(fā)形成的菌絲生長緩慢且分枝明顯比野生型多。游動孢子接種合豐47下胚軸分析發(fā)現突變體致病性顯著下降。
　　PsPITP1參與調控外泌途徑和寄主的防衛(wèi)