哈茨木霉rac基因的敲除.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、哈茨木霉是一種重要的生物防治真菌，能拮抗多種植物病原菌如立枯絲核菌、齊整小核菌、尖孢鐮孢菌、煙草疫霉等。在哈茨木霉拮抗病原菌的過程中病原菌會產生物理或化學信號分子。這些信號分子與哈茨木霉上相應的信號分子受體結合使哈茨木霉上的受體激活。活化的受體會啟動哈茨木霉細胞內多種信號傳導途徑從而使木霉發(fā)生一系列細胞功能的改變。小G蛋白耦聯受體介導的信號轉導是一種重要的信號轉導途徑。rac基因編碼的RAC蛋白是小G蛋白超家族中Rho家族的成員。rac

2、基因的功能在哺乳細胞中研究較深入但在絲狀真菌中的研究相對較少。對該基因的深入研究有助于揭示木霉拮病原菌的分子機制，并為闡明哈茨木霉中小G蛋白耦聯受體介導的信號轉導通路奠定基礎。
　　本實驗以與哈茨木霉親緣關較近的綠木霉為模板，通過設計一系列半隨機引物的方法成功獲得了哈茨木霉rac基因編碼區(qū)及其上下游的DNA序列共2741bp。其中哈茨木霉rac基因編碼區(qū)上游序列782bp，rac基因編碼區(qū)990bp，rac基因編碼區(qū)下游序列969

3、bp。比較哈茨木霉rac基因完整編碼區(qū)DNA序列與該基因的cDNA序列發(fā)現該基因編碼區(qū)含有五個內含子，且五個內含子均以GT起始以AG結尾。將rac基因編碼區(qū)DNA序列與全基因組測序的綠木霉，深綠木霉，里氏木霉DNA序列進行序列比對發(fā)現該基因編碼區(qū)的DNA序列與綠木霉部分DNA序列相似性最高。
　　根據獲得的rac基因編碼區(qū)及其側翼序列選擇恰當的酶切位點構建了兩種可以敲除哈茨木霉rac基因的質粒載體pPZPTtk8.10::rac:

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