劍麻根際聯(lián)合固氮菌的分離、篩選及鑒定.pdf

1、劍麻是我國(guó)熱區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)作物。目前劍麻種植生產(chǎn)中主要存在肥料特別是氮肥嚴(yán)重不足,而工業(yè)化肥成本高、利用率低的問(wèn)題,因此,本論文對(duì)我國(guó)3個(gè)主要?jiǎng)β楫a(chǎn)區(qū)海南昌江、廣西扶綏和廣東雷州的劍麻根際聯(lián)合固氮菌進(jìn)行研究,以期為今后研制劍麻專施微生物氮肥,解決劍麻生產(chǎn)肥料不足、生產(chǎn)成本高的問(wèn)題提供基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)通過(guò)選用LB、NFM、CCM、Ashby及改良的Dobereiner培養(yǎng)基,利用氣相色譜儀對(duì)劍麻根際聯(lián)合固氮菌進(jìn)行分離、篩選,測(cè)定固氮酶活性;并通過(guò)

2、對(duì)各菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)特征、需氧性、不同碳源利用和部分生理生化反應(yīng)測(cè)定,選用PKO和蒙金娜有機(jī)培養(yǎng)基以及改良的CCM培養(yǎng)基,分別采用溶磷圈法和比色法,對(duì)聯(lián)合固氮菌的溶磷性和分泌植物生長(zhǎng)激素特性進(jìn)行初步研究,并在此基礎(chǔ)上,利用分子生物學(xué)鑒定手段,對(duì)具有固氮能力的劍麻根際菌株進(jìn)行16S rDNA序列分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 1、從劍麻根際篩選到50株具有固氮能力的菌株。菌株固氮酶活性在1.8002nmol/mL·h～1765.6590

3、 nmol/mL·h之間,固氮酶活性達(dá)到1000nmol/mL·h以上有12個(gè)菌株。其中編號(hào)為ASN004的菌株固氮酶活性最高,達(dá)到1765.6590nmol/mL·h。
　　 2、在固氮能力較高的12個(gè)菌株中,ASN006和ASN023溶解有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷的能力最好;其次為ASN004、ASN012;而ASN002、ASN003、ASN004、ASN006、ASN012、ASN023和ASN037分泌植物生長(zhǎng)激素的能力相對(duì)較強(qiáng)。

4、
　　 3、通過(guò)16S rDNA序列分析及在NCBI網(wǎng)站的blast比對(duì)分析,結(jié)果表明菌株ASN001、ASN003、ASN004、ASN006、ASN035、ASN036為克雷伯氏菌屬(Klebsiella);ASN002、ASN005、ASN012、ASN017、ASN023、ASN029為陰溝腸桿菌屬(Enterobactercloacae complex);ASN010、ASN040、ASN044為泉發(fā)菌屬(Terrim

5、onas);ASN013、ASN018、ASN031為根瘤菌屬(Sinorhizobium);ASN022、ASN026、ASN027為伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia);ASN028、ASN041、ASN045為芽孢桿菌屬(Bacillus)。
　　 4、屬于克雷伯氏菌屬(Klebsiella)的ASN006和屬于陰溝腸桿菌屬(Enterobactercloacae complex)的ASN023,在固氮能力、溶磷性