CCAR-1在中國鹵蟲胚胎滯育解除過程中的作用.pdf

1、中國鹵蟲(Artemiasinica)是一種廣溫、耐高鹽的小型甲殼動物。廣泛分布于沿海鹽池和內(nèi)陸鹽湖中，有較強的抗逆能力。在惡劣外界環(huán)境的條件下能產(chǎn)出休眠卵，其胚胎發(fā)育被阻滯。當(dāng)環(huán)境條件適宜時，滯育解除，胚胎重新發(fā)育。
　　細(xì)胞分裂周期、凋亡調(diào)控蛋白Ⅰ(celldivision cycle and apoptosis regulator proteinⅠ，CCAR-1又稱CARP-1)在細(xì)胞周期進程中發(fā)揮重要作用，與其他細(xì)胞周期調(diào)

2、控蛋白復(fù)合，促進細(xì)胞凋亡。
　　在Wnt通路中，CCAR-1與β-catenin功能共激活，協(xié)助β-catenin在Wnt目標(biāo)基因作用中的轉(zhuǎn)錄激活;CCAR-1與APC/C亞基APC-2結(jié)合，在CFM-4的激活下，阻礙細(xì)胞進入G2/M期，參與caspase泛素蛋白酶途徑，導(dǎo)致cyclinB1蛋白缺失。CCAR-1通過與腫瘤抑制基因P53的結(jié)合，并作為P53的共激活劑，在轉(zhuǎn)錄調(diào)控的過程中起到作用，同時，其作為一種促凋亡信號，調(diào)控細(xì)胞

3、周期;CCAR-1和p160共激活劑復(fù)合物，在核內(nèi)作用于目標(biāo)基因產(chǎn)生適當(dāng)?shù)募に?。因此，CCAR-1在細(xì)胞周期調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用，但其在中國鹵蟲滯育及滯育解除過程中的細(xì)胞周期調(diào)控的作用尚需進一步探究。
　　本研究采用RACE、基因組步移(Genome Walking kit)技術(shù)得到中國鹵蟲As-CCAR-1的部分cDNA序列，并對其進行了生物信息學(xué)分析。以Real-Time qPCR、原位雜交、免疫熒光等技術(shù)對CCAR-1在鹵

4、蟲的不同發(fā)育時期、低溫、高鹽脅迫下的表達(dá)量、表達(dá)模式和表達(dá)部位進行了研究。
　　通過RACE技術(shù)獲得As-CCAR-1基因片段序列，片段長1594bp，內(nèi)包含1584bp的ORF序列，包含3個結(jié)構(gòu)域:S1-Like、DBC1和SAP。信息學(xué)分析預(yù)測分子量為129kDa，理論等電點為4.99，為疏水性蛋白。亞細(xì)胞定位實驗表明As-CCAR-1蛋白位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，各細(xì)胞器均有所分布。Real-Time qPCR結(jié)果顯示在胚胎滯育解除，發(fā)

5、育的中后期具有最高的表達(dá)量(3d)，低溫和高鹽脅迫下的表達(dá)顯著降低。原位雜交實驗結(jié)果顯示As-CCAR-1基因在中國鹵蟲個體發(fā)育全階段、各組織均有所表達(dá)。上述實驗結(jié)果說明，As-CCAR-1基因與調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡有關(guān)，且廣泛分布于鹵蟲體內(nèi)。初步證明其參與了中國鹵蟲滯育解除過程中促進細(xì)胞凋亡的作用。
　　本研究旨在闡明CCAR-1基因在中國鹵蟲滯育解除及胚胎生長發(fā)育過程中的作用，對進一步開發(fā)利用鹵蟲資源有重要的的指導(dǎo)意義，對細(xì)