內蒙古白絨山羊角蛋白14(K14)基因啟動子多態(tài)性及其與絨毛性狀關聯(lián)性.pdf

1、角蛋白14（Keratin14，KRT14，K14）作為哺乳類動物絨毛結構蛋白，與角蛋白5成對表達于表皮基底層細胞、絨毛及毛囊外根鞘細胞內,是覆層鱗狀上皮的生物標記物。因此我們對內蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子進行了相關研究。
　　試驗一：內蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子的克隆和分析。本試驗以內蒙古白絨山羊DNA為模板，參照牛的角蛋白14序列設計和合成引物，通過PCR擴增獲得長度為2834bp（登錄號為JQ063036）,包括啟動子區(qū)

2、2631bp和結構基因第一外顯子區(qū)203bp的內蒙古白絨山羊角蛋白14基因片段，對角蛋白14基因啟動子結構進行了生物信息學分析，并與人和牛角蛋白14啟動子序列做了比對。結果：山羊角蛋白14啟動子結構與人角蛋白14啟動子只含有Sox-5，GATA-1，GATA-1/2結合位點等3個共同的轉錄因子結合位點；但與牛的有較高的相似性，含有Sox-5，SRY，Cdx A，Myo D，MZF1，GATA-1/3，Nkx-2結合位點等7個共同的轉錄因

3、子結合位點。
　　試驗二：內蒙古白絨山羊角蛋白14基因單核苷酸多態(tài)性分析。①在對內蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子序列克隆的基礎上，首先以20只山羊混合DNA為模板通過克隆測序尋找多態(tài)位點，結果發(fā)現(xiàn)引物 D2和D4擴增片段-421和-1838處出現(xiàn)套峰。②在-421和-1838處分別設計引物S1和S2，以150頭內蒙古白絨山羊為研究對象，應用PCR-SSCP技術和DNA測序技術檢測內蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子的分子變異。結果：引物S

4、1擴增產物有AA、AG、GG3種基因型；引物S2擴增產物有CC、CT、TT3種基因型；克隆測序分析，發(fā)現(xiàn)-421和-1838位點分別發(fā)生了A→G和C→T的堿基突變。③群體遺傳學表明：經χ2檢驗。-421（A→G）和-1838（C→T）位點上的SNP均處于Hardy-Weinberg(P>0.05)平衡狀態(tài)，且均屬中度多態(tài)。-421（A→G）位點AA型個體的絨厚顯著低于GG型和AG型個體，GG型個體的絨長顯著高于AA型個體；-1838（C