植物凝集素基因植物表達載體的構建及遺傳轉化甘蔗.pdf

1、甘蔗(Saccharum offcinarum L.)是我國最重要的糖料作物,同時也是一種重要的能源經濟植物。甘蔗粉蚧和綿蚜是甘蔗的重要害蟲,它們不但直接造成甘蔗減產、糖含量降低,而且還是多種甘蔗病毒的傳播媒介,間接傳播病毒引起的病害損失比蟲害直接造成的損失更為嚴重。利用植物基因工程技術把抗蟲基因導入優(yōu)良甘蔗品種中使其得到有效的表達從而表現出抗蟲性是培育甘蔗抗蟲品種最有效的途徑。
　　 雪花蓮凝集素(gna)是目前研究較多的一種

2、單子葉植物甘露糖結合凝集素,廣泛應用于植物害蟲的治理。它能結合到昆蟲消化道上皮細胞糖蛋白受體上,對昆蟲產生局部或系統(tǒng)毒害,抑制害蟲的生長發(fā)育及繁殖,對蚜蟲和葉蟬等同翅目害蟲具有高效毒性,同時對鱗翅目、鞘翅目的害蟲也有一定的毒性。因此把gna基因轉入高產高糖甘蔗品種中使其得到高效的表達,以期提高甘蔗對綿蚜和粉蚧等同翅目害蟲的抗蟲性。
　　 本研究成功構建了中間表達載體pUN和一個組成型啟動子Ubi驅動gna基因的植物表達載體pUN

3、G,并用“凍融法”將其導入根癌農桿菌EHA105中;通過農桿菌介導法對甘蔗進行遺傳轉化,獲得抗性植株227株,對其中的183株進行PCR檢測,有124株呈陽性。另外轉化了Rbcs驅動的gna基因的植物表達載體prG,獲得54株抗性植株,PCR結果表明有35株抗性植株呈陽性。初步證明gna基因已整合到甘蔗的基因組中。
　　 隨機選取6株轉Ubi驅動的gna PCR陽性植物進行RT-PCR,檢測植株均呈陽性。對這些陽性植株進行進一步