用于海洋弧菌快速檢測(cè)的免疫磁珠技術(shù)的研究.pdf

1、弧菌屬細(xì)菌是海水魚(yú)、蝦、貝類(lèi)的一種常見(jiàn)致病菌，由其引發(fā)的養(yǎng)殖病害每年為國(guó)家造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)，弧菌屬細(xì)菌中的一些種群也是引起人類(lèi)急性腸胃炎的主要病原生物，它們可在人群中引起暴發(fā)性食物中毒，造成散發(fā)性米泔樣腹瀉和痢疾等中毒癥狀。因此，檢測(cè)海洋環(huán)境中病原弧菌對(duì)于保障人體健康和促進(jìn)海水養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展等都有著重要的意義。然而，目前檢測(cè)病原弧菌的技術(shù)存在方法繁瑣、耗時(shí)很長(zhǎng)、集成度低等缺點(diǎn)，無(wú)法滿(mǎn)足海洋監(jiān)測(cè)的需要，因此亟需研發(fā)快速、簡(jiǎn)便、靈敏

2、、集成度高的檢測(cè)技術(shù)。
　　 免疫磁珠(Immonumagnetic beads,IMB)分離技術(shù)是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究較多的一種新的免疫學(xué)技術(shù)，它具備了固相化試劑特有的優(yōu)點(diǎn)以及免疫學(xué)反應(yīng)的高度專(zhuān)一性等特點(diǎn)。本研究就是應(yīng)用這種技術(shù)—免疫磁珠技術(shù)對(duì)病原性海洋弧菌進(jìn)行快速檢測(cè)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的各種理化因子進(jìn)行優(yōu)化，從而建立起實(shí)用、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的病原性海洋弧菌免疫磁珠快速檢測(cè)體系。結(jié)果如下：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通過(guò)耳

3、緣靜脈注射對(duì)新西蘭大白兔進(jìn)行免疫總共獲得效價(jià)達(dá)到1：5120的兔抗鰻弧菌免疫血清210ml、1：5120的兔抗溶藻弧菌免疫血清150ml、1：2560的兔抗河流弧菌免疫血清230ml、1：2560的兔抗溶藻弧菌免疫血清190ml。為后續(xù)試驗(yàn)研究提供了大量高效價(jià)的免疫血清。
　　 2.通過(guò)免疫磁珠分離技術(shù)純化實(shí)驗(yàn)室制備的兔抗血清中的IgG，并與A蛋白親和層析法比較得出：抗體包被磁珠在10min就可以達(dá)到飽和，即100μL磁珠可以

4、結(jié)合22.7μg IgG。兩種方法得到IgG純度都很高，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳都只得到25KD和55KD左右的兩條帶；免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法與以往的其他分離純化方法相比具有反應(yīng)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、所得抗體純度高、得率高等特點(diǎn)。其中免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價(jià)(1：307200)高于A蛋白親和層析法(1：256000)；免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時(shí)間(10min)遠(yuǎn)小于A蛋白親和層析法所需的20min，其得率(11.5mg