HPLC-FLD法檢測雞體內(nèi)阿奇霉素殘留及消除規(guī)律研究.pdf

1、阿奇霉素是第二代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的一種，尚未列入獸醫(yī)臨床用藥，但在養(yǎng)殖業(yè)中的應用已較頻繁，給動物源性食品安全帶來了隱患。為加強對動物性食品中阿奇霉素殘留的監(jiān)控，本文建立了一種柱前衍生高效液相色譜熒光法，檢測雞體內(nèi)阿奇霉素的殘留。
　　 試驗樣品（血漿、肌肉、肝臟）經(jīng)過氫氧化鈉堿化后，用正己烷提取凈化，吸取適量有機層45℃氮氣吹干，再加入衍生試劑9-芴基氯甲酸酯和硼酸鹽緩沖液置于50℃水浴鍋中衍生40min，最后加入甘氨酸作為終止

2、液上機檢測。試驗采用AgilentC18柱（4.6mm×250mm）作為分離色譜柱；選擇0.05mo1/L磷酸鹽緩沖液（含0.2％三乙胺）：乙腈=29:71(V/V)pH值為5.8的混合液為流動相：設(shè)置激發(fā)波長(EX)為265nm，發(fā)射波長(EM)為315nm，流速1.2mL/min，柱溫35℃，進樣量為20μL。測得阿奇霉素最低檢測限血漿為0.02μg/mL、肌肉和肝臟為0.03μg/g，最低定量限三者均為0.04μg/mL(μg/g

3、)，標準曲線的線性范圍為0.04～5μg/mL（μg/g）。當添加濃度為0.1μg/mL、1μg/mL、3μg/mL時，AZM在血漿中的日內(nèi)變異系數(shù)范圍在0.82％～1.04％之間，日間變異系數(shù)范圍在1.03％～1.27％之間；添加濃度為0.1μg/g、1μg/g、3μg/g時，AZM在雞肌肉中日內(nèi)變異系數(shù)范圍在0.91％～1.15％之間，日間變異系數(shù)范圍在1.16％～1.31％之間，AZM在雞肝臟中的日內(nèi)變異系數(shù)范圍在1.03％～1.

4、81％之間，日間變異系數(shù)范圍在1.20％～2.12％之間。分別添加0.1、1、3μg/mL(μg/g)三個水平的阿奇霉素到各空白組織液后，測得雞血漿、肌肉、肝臟中阿奇霉素的平均回收率分別為95.2±0.20％、76.3±0.16％、77.7±0.93％。從以上試驗數(shù)據(jù)可以看出，本試驗所建立的高效液相色譜熒光法檢測雞體內(nèi)阿奇霉素，具有簡單易行、靈敏可靠的特點，可以為動物性食品安全監(jiān)測提供一定的依據(jù)。
　　 實際應用中，對雞進行20

5、mg/kg單劑量灌服給藥后，分別在2、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72h取雞血漿、肌肉和肝臟樣品，采用本試驗建立的方法進行檢測，血漿48h檢測不出阿奇霉素，肌肉和肝臟中阿奇霉素消除較慢，到72h檢測不到。阿奇霉素在各組織中的消除曲線方程分別為C血漿=7.7224e-0.1362t，C肌肉=21.668e-0.0732t，C肌臟=21.052e-0.0567t。藥物的半衰期分別為：t1/2血漿=1.91(h);t1/2