一株黃瓜枯萎病拮抗細(xì)菌的分離鑒定及其相關(guān)特性的研究.pdf

1、黃瓜枯萎病是一種對(duì)黃瓜種植生產(chǎn)有著嚴(yán)重影響的土傳病害，在瓜類(lèi)等蔬菜種植地多有發(fā)生，其病原菌為尖孢鐮刀菌。傳統(tǒng)的防治方法是施用化學(xué)農(nóng)藥，但藥物殘留、耐藥性等多種副作用對(duì)食品安全、環(huán)境構(gòu)成了巨大威脅。生物防治方法因?yàn)樽饔妹黠@、對(duì)環(huán)境相對(duì)安全，有利于農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的改善而受到人們的重視。
　　 從采自山東、云南、陜西等地的蔬菜大棚土壤中分離篩選出一株對(duì)黃瓜枯萎病有明顯抑制作用的拮抗細(xì)菌YHJ15，經(jīng)過(guò)形態(tài)觀察、生理生化特征

2、分析和16S rDNA序列測(cè)定，將其初步鑒定為短小芽孢桿菌。該菌適于生長(zhǎng)于pH5-7中性偏酸的環(huán)境，對(duì)氧氣的需求量比較大，適于生長(zhǎng)的NaCl濃度比較寬。其生長(zhǎng)最適宜的碳源和氮源分別是半乳糖和牛肉膏。對(duì)抗生素的敏感性較高，尤其對(duì)林可霉素比較敏感。在15-35℃范圍內(nèi)，生長(zhǎng)速度沒(méi)有明顯差異。另外，YHJ15能夠產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶等。
　　 通過(guò)對(duì)峙實(shí)驗(yàn)，YHJ15的發(fā)酵液表現(xiàn)出對(duì)黃瓜枯萎病病原菌的明顯抑制效果，而且發(fā)酵液經(jīng)過(guò)121℃，30

3、min高壓滅菌后，抑制效果下降不明顯。YHJ15的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌有一定的抑制效果，但是相對(duì)抑菌率僅有25.5％；非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌菌絲抑制效果則較高，相對(duì)抑菌率可達(dá)48.9％。發(fā)酵液對(duì)黃瓜種子的發(fā)芽率未表現(xiàn)出抑制作用。發(fā)酵液拮抗活性的優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為大豆蛋白胨，最佳pH為7-8，最佳接種量為2.5％，30mL/250mL為最佳裝液量，35h范圍為最適培養(yǎng)時(shí)間，25-35℃為最佳溫度范圍。

4、>　　 本文還對(duì)YHJ15的拮抗物質(zhì)的理化性質(zhì)做了初步探索。發(fā)酵液經(jīng)70％硫酸銨沉淀所獲得的粗提物的拮抗效果最好，拮抗物質(zhì)能夠經(jīng)過(guò)50-100℃、30min處理后，拮抗活性有所下降。拮抗物質(zhì)對(duì)酸性環(huán)境比較穩(wěn)定，但對(duì)堿性環(huán)境比較敏感，表現(xiàn)在pH5-8時(shí)抑菌活性較高，在pH超過(guò)12時(shí)拮抗物質(zhì)幾乎沒(méi)有抑菌活性。經(jīng)過(guò)蛋白酶處理后，拮抗物質(zhì)均有一定程度的活性下降，下降幅度均超過(guò)了50％。拮抗物質(zhì)對(duì)紫外線有一定敏感性，但下降幅度與紫外線強(qiáng)度、輻射

5、時(shí)間無(wú)嚴(yán)格正相關(guān)關(guān)系。拮抗物質(zhì)對(duì)氯仿不敏感。經(jīng)過(guò)常溫和4℃放置處理，拮抗物質(zhì)的相對(duì)抑菌率會(huì)隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，常溫放置時(shí)，第14d即可有沉淀析出，第2個(gè)月時(shí)相對(duì)抑菌率已經(jīng)下降至34.27％，第6個(gè)月時(shí)已經(jīng)無(wú)法檢出抑菌活性。而在4℃放置時(shí)，在到第4個(gè)月時(shí)拮抗活性才有明顯降低。拮抗物質(zhì)對(duì)于0.2mol/L-1.0mol/L濃度范圍的NaCl不敏感。另外拮抗物質(zhì)的粗提液的活性經(jīng)高壓滅菌后顯著下降，相對(duì)抑菌率下降至37.29％，說(shuō)明拮抗物質(zhì)中有一