落葉松枯梢病的生物防治與分子檢測(cè)初步研究.pdf

1、本文研究了長(zhǎng)白山、完達(dá)山、小興安嶺地區(qū)落葉松枯梢病梢棲真菌的群落結(jié)構(gòu)，應(yīng)用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法對(duì)真菌進(jìn)行了鑒定，并利用所分離到的真菌篩選出拮抗菌株并進(jìn)行了林間生物防治試驗(yàn);以梢棲真菌的序列為基礎(chǔ)，針對(duì)落葉松枯梢病(Botryosphaeria laricina(Sawada) Y.Z.Shang)設(shè)計(jì)特異引物，初步探索出了落葉松枯梢病分子檢測(cè)的方法。
　　(1)用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法，對(duì)落葉松枯梢病病原真菌（B.laric

2、ina）進(jìn)行鑒定，并獲取NCBI基因登錄號(hào):EU442284。經(jīng)DNAman比對(duì)小興安嶺地區(qū)、長(zhǎng)白山地區(qū)、完達(dá)山地區(qū)三個(gè)地點(diǎn)所獲得的菌株，ITS區(qū)域相似度為100％。
　　(2)從落葉松病/健康梢上共分離到子囊菌3屬（Botryosphaeria、 Chaetomium和Sordaria），有絲分裂菌15屬。夏季梢棲真菌與冬季梢棲真菌相比，多出7種有絲分裂菌。冬季落葉松枯梢病/健康梢上分離率最高的為Alternaria，Pesta

3、lotiopsis，以及Epicoccum，分別為32.2％，21.8％和19％;夏季落葉松枯梢病/健康梢上的優(yōu)勢(shì)種類為Alternaria，其次為T(mén)olura和Epicoccum，其分離率分別為32.0％，18.0％和14.0％。3年生病梢上種類略為豐富，而1年生健康枝條上種類相對(duì)較少。B.laricina主要分布于1年生梢部;健康及感病未發(fā)病的2、3年梢部，均有Chaetomium、Sordaria和Trichoderma出現(xiàn)，各個(gè)

4、季節(jié)病/健康梢均部有分布的種有:Epicoccum、Alternaria、Trichoderma、Chaetomium和Sordaria，共5屬。
　　(3)根據(jù)拮抗系數(shù)、抑菌率、被覆蓋程度和防治預(yù)試驗(yàn)的綜合評(píng)價(jià)確定Sordaria fimicola、Trichoderma atroviride和Chaetomium globosum為生防菌。野外防治試驗(yàn)表明，綜合比較防治效果為S.fimicola＞代森錳鋅400倍液＞T.atr

5、oviride＞C.globosum。三種菌劑在50％噴灑濃度時(shí)，真菌多樣性最大;防治區(qū)真菌群落數(shù)量明顯少于非防治區(qū)群落數(shù)量;非防治區(qū)同期梢棲真菌分離結(jié)果顯示在健康梢部，分離到大量Trichoderma、Chaetomium，說(shuō)明在自然界中Trichoderma、Chaetomium本身對(duì)B.laricina有較強(qiáng)的抑制作用。
　　(4)通過(guò)對(duì)落葉松梢棲真菌ITS序列的分析，設(shè)計(jì)出特異引物ITSA1與ITSB1。該特異引物可以將落