DNA指紋圖與微衛(wèi)星DNA技術(shù)在近交系大、小鼠遺傳監(jiān)測中的應(yīng)用研究.pdf

1、該文通過對DNA指紋技術(shù)和PCR擴增微衛(wèi)星DNA技術(shù)在近交系大、小鼠遺傳檢測中的應(yīng)用研究,并與生化位點標(biāo)記分析法進行比較,旨在篩選出具有精確、可靠、特異性好的實驗動物遺傳檢測方法,為建立分子生物學(xué)實驗動物遺傳質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ).1.采用公安部二所自行研制的JL-02多位點探針對5個品系的近交系小鼠和2個品系近交系大鼠進行了DNA指紋分析,經(jīng)過對同一DNA的反復(fù)制作DNA指紋圖和同一個體不同組織進行的DNA指紋圖制作及對親代和子代

2、(同品系內(nèi)和不同品系同雜交)間的DNA指紋圖比較.2.通過對4家單位提供的BALB/c、C57品系小鼠,1家單位提供的615、DBA/2各一窩(其中母鼠各1只、仔鼠各3只),經(jīng)提取腦組織DNA,限制性內(nèi)切酶Hinf I酶切,利用JL-02多位點探針Southern雜交技術(shù)對其進行了DNA指紋分析.3.實驗采用JL-02多位點探針對北京和西安地區(qū)較大的7家實驗動物生產(chǎn)供應(yīng)單位的5個BALB/c群,2個BALB/c-nu/nu群,4個C<,

3、57>群,1個CBA/N群和1個DBA/2群近交系小鼠進行了DNA指文圖分析,并與常規(guī)生化標(biāo)記分析法進行了比較,結(jié)果顯示:所產(chǎn)生的DNA指紋圖的圖帶數(shù)均在17-22條,具有良好的多態(tài)性.生化標(biāo)記分析中Hbb位點顯示異常的BALB/c及BALB/c-nu/nu小鼠與其同群體正常小鼠的DNA指紋圖有較大差異,兩個體之間的相似系數(shù)(F)及共有帶率(X)均在0.8以下.4.采用DNA指紋圖法對國內(nèi)已知的7個品系9個近交系大鼠群體進行了分析.結(jié)果

4、表明:不同品系之間DNA指紋圖差異較大,其平均圖帶數(shù)為16.360±2.178,共有帶率為0.061±0.008,相似系數(shù)為0.062±0.008,相同DNA指紋圖概率為3.691×10<'-23>.5.選取小鼠不同染色體上的16個微衛(wèi)星位點,通過PCR擴增對國內(nèi)常用的10個近交系小鼠進行了微衛(wèi)星多態(tài)性分析.結(jié)果表明14個微衛(wèi)星DNA具有穩(wěn)定擴增效果,在同一品系不同個體之間表現(xiàn)單態(tài)性;在不同品系之間表現(xiàn)多態(tài)性,在每一微衛(wèi)星位點有2至5個

5、等位基因.6.實驗利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增技術(shù)對國內(nèi)北京和哈爾濱等4家單位6個品系(SHR、SHRSP、LEW、RCS、WKY和F344)的8個近交系大鼠群體進行了DNA多態(tài)性的分析研究.結(jié)果表明9個微衛(wèi)星位點(位點名稱為:PKC、SCN2A、CAT、MYC、APOC3、THY1、SMST、AFP、AGT、UCP)具有顯著多態(tài)性;不同品系個體之間具有多態(tài)性;同一群體不同個體之間除SHR(哈)的SMST位點和WKY(哈)的AGT位點

6、出現(xiàn)一定的差異外,其他均沒有差異;不同地區(qū)同一品系不同個體之間也存在一定的差異.說明該方法能有效地對近交系與雜交系、品系與品系、品系與亞系加以區(qū)分.7.為了解和掌握國內(nèi)BALB/c小鼠遺傳質(zhì)量狀況,驗證微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)在近交系小鼠遺傳檢測中應(yīng)用的可靠性,該實驗應(yīng)用所篩選的小鼠不同染色體上的14個微衛(wèi)星位點,通過PCR擴增對北京、上海、沈陽、廣州、長春、重慶和哈爾濱7個地區(qū)11個廠家提供的BALB/c小鼠進行遺傳質(zhì)量分析.8.采用JL-02