豬傳染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究.pdf

1、豬乙型肝炎病毒（Hepatitis B liked Virus of swine，swHBV）和豬戊型肝炎病毒（SwineHepatitis E Virus，sw HEV）是當今影響人和動物健康的兩種重大人畜共患傳染病，兩病的廣泛流行和蔓延已給人類和動物的健康造成了嚴重威脅。在現代化規(guī)模養(yǎng)豬場中，HBV與HEV往往混合感染，發(fā)病率呈上升趨勢。為了了解這兩種病原在豬群中的感染狀況及病原特征，本實驗以HBV和HEV當地流行毒株為研究材料，進

2、行了流行病學調查、基因克隆、基因圖譜繪制、分子結構特征分析、分子診斷及免疫研究，主要研究成果如下：
　　 1.應用ELISA技術，對蘭州及周邊地區(qū)的屠宰場、養(yǎng)殖場和散養(yǎng)豬采集血樣976份，進行流行病學調查，并對豬HBV進行檢測。結果如下：
　　 （1）豬類乙肝的各項檢測結果顯示，豬群中類乙肝陽性率較高，其中大三陽和小三陽率總體占到1.5％，病毒發(fā)現復制（e抗原）的豬占5.9％；產生抗體（表面抗體）的豬達16％。
　

3、　 （2）在甘肅的靖遠和景泰地區(qū)豬類乙肝的陽性率比較高，分別達到25.7％和20.5％。
　　 （3）八月齡以上的豬與八月齡以下的豬相比，類乙肝陽性率偏高，分別為14.6％和
　　 4.5％。
　　 （4）泔水豬比集約化豬場豬乙類肝陽性率高，分別為23.2％和5.9％。
　　 2.分段克隆了swHBV的S、C、P基因片段，繪制基因圖譜和系統(tǒng)進化樹，結果表明，擴增的swHBV-S基因長251bp，與國內外

4、參考毒株CHN-QH5、Tibet127等12個毒株核苷酸序列的同源性分別為99.0％～99.6％，其中與CHN-QH38株遺傳距離較近；擴增的swHBV-C基因長550bp，與國內外參考毒株SK300、NSS-2等12個毒株核苷酸序列的同源性分別為99.0％～99.8％，其中與CHN-L45株遺傳距離關系較近；擴增的swHBV-P基因長1414bp，與國內外參考毒株G683-1、S245-A2等10個毒株核苷酸序列的同源性分別為94.

5、8％～95.8％，其中與S245-A2株遺傳距離較近；
　　 3.采集甘肅、青海部分地區(qū)養(yǎng)殖場的豬糞便和膽汁556頭份，進行了豬戊型肝炎病毒（swHEV）的RT-PCR檢測，糞便和膽汁中豬戊型肝炎陽性率高達4.2％和10.7％。
　　 4.設計7對巢氏PCR引物，利用RT-RCR技術，分段克隆了涵蓋swCH146株基因組的cDNA片段，并對swHEV146株全基因特征進行了分析，繪制了swCH146株全基因圖譜和系統(tǒng)進化

6、樹，結果表明，該毒株全基因組長7284bp，與HEVG-4（AJ272108.1）和swCH25（AY594199.1）兩株病毒親緣關系最近，同屬于HEV基因Ⅳ型，其中與新疆swCH25株同源性最高，達到89.5％。
　　 對swCH146株各基因的核苷酸同源性進行分析顯示，swCH146株包含3個閱讀框（ORF1、ORF2、ORF3），swHEV146株ORF1與己報道的HEVⅠ型株（D11093）、Ⅱ型mexican str

7、ain株（M74506.1）和Ⅲ型SWKOR-2株（FJ426404）的ORF1核苷酸同源性分別為87.5％、83.2％和91.0％，而與Ⅳ型KNIH-hHEV4株（FJ763142.1）的同源性高達97.2％；swHEV146株ORF2與以上Ⅰ～Ⅲ型毒株的核苷酸同源性分別為92.6％、92.4％和94.9％，與Ⅳ型KNIH-hHEV4株同源性為98.9％；swHEV146株ORF3與以上Ⅰ～Ⅲ型毒株的核苷酸同源性分別為87.5％、90