綿羊肺炎霉形體的培養(yǎng)純化研究與間接ELISA檢測(cè)抗體方法的初步建立.pdf

1、綿羊肺炎霉形體(MO)所致綿羊肺炎霉形體病是目前羊場(chǎng)中發(fā)病率和致死率最高的疾病之一。本研究通過(guò)對(duì)綿羊肺炎霉形體進(jìn)行菌株純化，對(duì)比不同培養(yǎng)基，含不同血清的對(duì)比培養(yǎng)基和含不同抗生素濃度的對(duì)比培養(yǎng)基對(duì)綿羊肺炎霉形體生長(zhǎng)的影響，從而純化了綿羊肺炎霉形體菌株Y；優(yōu)化篩選出以加入10％的豬血清和正?？股貪舛菷M-4培養(yǎng)基培養(yǎng)綿羊肺炎霉形體效果最好，為進(jìn)一步研究其病原學(xué)和致病機(jī)理打下基礎(chǔ)。 在改良FM-4.液體培養(yǎng)基中接種綿羊肺炎霉形體，4

2、8h后收集菌體，經(jīng)蛋白酶抑制劑處理；通過(guò)抗原提取方法的篩選，采用低滲.凍融.超聲裂解法獲得MO菌體蛋白作為包被抗原，初步建立了檢測(cè)該病抗體的間接ELISA方法。通過(guò)試驗(yàn)比較，確定了ELISA的最佳反應(yīng)條件為：抗原包被濃度為17.5μg/ml；以含1％BSA的PBST為最佳封閉液，37℃反應(yīng)2h；血清最佳工作濃度為1：320，37℃反應(yīng)1h；酶標(biāo)羊抗兔IgG的最佳工作濃度為1：5000，37℃反應(yīng)1h；陰陽(yáng)性臨界值為0.084。菌體蛋白能