羊膜移植聯(lián)合胸腺素β4治療犬角膜損傷效果.pdf

1、角膜損傷是犬臨床眼科疾病中的常見(jiàn)類(lèi)型，常出現(xiàn)角膜混濁、潰瘍。持續(xù)性的角膜損傷存在易導(dǎo)致角膜穿孔或角膜血管翳、色素沉著，影響正常視力，嚴(yán)重者甚至?xí)?dǎo)致失明。目前寵物臨床中針對(duì)犬角膜損傷疾病可采取的治療措施有限。
　　 羊膜本身具有抗炎、抗菌、抗病毒及抑制血管生成等特性，還能促進(jìn)上皮細(xì)胞增長(zhǎng)，這使其在人醫(yī)眼科臨床中的研究與應(yīng)用日益廣泛，但在犬眼科疾病中的應(yīng)用研究還很少。胸腺素β4(thymosin beta4，Tβ4)能抑制細(xì)胞凋亡

2、及炎癥反應(yīng)，減少角膜新生血管的形成，促進(jìn)角膜細(xì)胞遷移及黏附。目前，羊膜移植聯(lián)合Tβ4治療犬角膜損傷的效果尚不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)羊膜移植聯(lián)合Tβ4用于犬角膜損傷治療，為尋求快速有效地犬角膜損傷治療方法提供依據(jù)。
　　 犬角膜上皮細(xì)胞采用組織塊法原代培養(yǎng)，傳至第三代的上皮細(xì)胞按5×105/mL接種于96孔板，培養(yǎng)基中添加不同濃度（0ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL）Tβ4，分別于37℃、

3、5％CO2條件下培養(yǎng)24h和48h，采用CCK-8試劑盒測(cè)定角膜上皮細(xì)胞增殖情況，以光密度值表示。
　　 選取成年健康雜交犬24只，對(duì)每只犬右眼使用0.5moL/mL NaOH溶液浸潤(rùn)的圓形濾紙片（直徑6mm）作用1min，建立堿燒傷模型。模型建立當(dāng)天為第0d。實(shí)驗(yàn)犬隨機(jī)分為4組，即空白組、羊膜移植組、Tβ4組和羊膜移植聯(lián)合Tβ4組。羊膜移植組及羊膜移植聯(lián)合Tβ4組堿燒傷模型后(d0)實(shí)施羊膜移植手術(shù);于實(shí)驗(yàn)的d1～10，Tβ4

4、組及羊膜移植聯(lián)合Tβ4組每天使用1μg/μL Tβ4滴眼液，而空白組和羊膜移植組每天使用無(wú)菌PBS液點(diǎn)眼，同時(shí)各實(shí)驗(yàn)犬每天使用氧氟沙星滴眼液點(diǎn)眼。采用裂隙燈拍攝角膜照片，觀察角膜損傷修復(fù)情況，并對(duì)角膜混濁度及角膜新生血管評(píng)分。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:1～50ng/mL Tβ4促進(jìn)犬角膜上皮細(xì)胞增殖呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性的作用。50ng/mL Tβ4促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞增殖效果高于其它各組(P＜0.05)。100ng/mL Tβ4對(duì)犬角膜上皮細(xì)

5、胞增殖呈現(xiàn)促進(jìn)作用，與空白組相比差異性顯著(P=0.00)。Tβ4作用48h后角膜上皮細(xì)胞增殖效果優(yōu)于作用24h的角膜細(xì)胞增殖。羊膜移植聯(lián)合Tβ4在犬角膜堿燒傷模型中的使用，能有效促進(jìn)角膜損傷修復(fù)，降低角膜混濁度，抑制角膜新生血管。對(duì)角膜混濁的的評(píng)分結(jié)果分析表明，d1～10羊膜移植組及羊膜移植聯(lián)合Tβ4組評(píng)分顯著低于對(duì)照組和Tβ4組(P＜0.05)。對(duì)角膜新生血管評(píng)分結(jié)果分析表明，羊膜移植組d3～10評(píng)分均高Tβ4組及羊膜移植聯(lián)合Tβ4