七種雙殼貝類(lèi)染色體核型及熒光原位雜交研究.pdf

1、本研究應(yīng)用核型分析技術(shù)和熒光原位雜交(flourescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)，對(duì)四種珍珠貝及三種牡蠣染色體進(jìn)行了染色體核型分析及FISH分析。主要結(jié)果如下：
　　 1、以牡蠣鰓細(xì)胞為材料，采用PHA處理法、低溫同步化法及活體去殼法進(jìn)行預(yù)處理，制作成體染色體標(biāo)本；以馬氏珠母貝擔(dān)輪幼蟲(chóng)為材料，采用PHA促繁殖獲取胚胎法，制作胚胎染色體標(biāo)本。對(duì)不同時(shí)間不同處理方式獲得牡蠣染色體分裂相比例、

2、PHA促繁殖獲取胚胎法獲得馬氏珠母貝染色體分裂相比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PHA處理法在24h時(shí)能獲取最多分裂相(3.5‰)，低溫同步化法在72h時(shí)能獲得最多分裂相(2.2‰)，活體去殼法始終保持較高分裂相比例(3.6‰)，PHA促繁殖獲取胚胎法獲得最大分裂相比例(10‰)。四種方法都能獲得理想的中期分裂相數(shù)目。其中，低溫同步化法缺點(diǎn)是溫度難控制、預(yù)處理時(shí)間長(zhǎng)；活體去殼法易導(dǎo)致貝類(lèi)死亡；PHA促受精獲取胚胎法缺點(diǎn)是胚胎的獲取受繁殖季節(jié)限制

3、。PHA處理法預(yù)處理時(shí)間短、獲取分裂相數(shù)目多，無(wú)疑是貝類(lèi)成體染色體制備的最好方法。同時(shí)，PHA也為貝類(lèi)人工繁殖提供了一種更為有效的手段。
　　 2、分析了四種珍珠貝及三種牡蠣染色體核型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四種珍珠貝染色體眾數(shù)均為28。馬氏珠母貝(Pinctada martensii)核型公式為2n=14m+12sm/st+2t，NF=54；黑珠母貝(P. nigra)核型公式為2n=4m+4sm+20t，NF=36；斑珠母貝(P. ma

4、cula)核型公式為2n=28t，NF=28；企鵝珍珠貝(Pteria penguin)核型公式為2n=4m+24t，NF=32。鑒于四種珍珠貝染色體組型的相似性，可以認(rèn)為他們的親緣關(guān)系比較接近，如果進(jìn)行種間雜交，雜交成功和產(chǎn)生雜交后代的可能性非常大。三種牡蠣染色體眾數(shù)均為20。齒牡蠣(Dendistrea.folium)核型公式為2n=10m+10sm，NF=40；牡蠣(Crassostrea sp.)核型公式為2n=20m，NF=4

5、0；咬齒牡蠣(Saccostrea mordax)核型公式為2n=20m，NF=40。差異主要出現(xiàn)在對(duì)中部、亞中部著絲粒染色體；端部、亞端部著絲粒染色體這些形態(tài)比較類(lèi)似的染色體的判斷上。造成這種差異可能存在如下原因：1、實(shí)驗(yàn)方法不同，秋水仙素處理的時(shí)間不同，導(dǎo)致染色體伸展程度的差異；2、實(shí)驗(yàn)材料不同，有的以鰓組織為材料，有的以早期胚胎等為材料；3、所取材料屬于不同的地理種群；4、在后期分析過(guò)程中，人為判斷染色體著絲點(diǎn)位置的主觀影響，均可

6、能造成染色體分類(lèi)的差異。
　　 3、研究了重復(fù)序列在七種雙殼貝類(lèi)染色體上的定位。采用順序熒光原位雜交技術(shù)，對(duì)同一個(gè)染色體標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)記。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脊椎動(dòng)物端粒序列(TTAGGG)10在七種雙殼貝類(lèi)的每一條染色體臂的端部區(qū)域都檢測(cè)到較強(qiáng)黃綠色熒光信號(hào)。在染色體中部未被檢測(cè)到，推測(cè)近期并未發(fā)生染色體重排或末端融合。
　　 18S-28S rDNA在馬氏珠母貝染色體上檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)，位于第8號(hào)染色體短臂近端粒區(qū)域；在黑珠母貝

7、染色體上檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)，位于第3號(hào)染色體短臂近端粒區(qū)域：在斑珠母貝染色體上檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)，位于第3號(hào)染色體臂的近端粒區(qū)域；在企鵝珍珠貝染色體上檢測(cè)到四簇?zé)晒庑盘?hào)，分別位于第1號(hào)染色體及第9號(hào)染色體臂的近端粒區(qū)域。在齒牡蠣染色體上檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)，位于第3號(hào)染色體臂的近端粒區(qū)域；在牡蠣染色體上檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)，位于第3號(hào)染色體臂的近端粒區(qū)域；在咬齒牡蠣染色體上檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)，位于第3號(hào)染色體臂的近端粒區(qū)域。推測(cè)僅具有-個(gè)1

8、8S-28S rDNA位點(diǎn)的珠母貝屬的馬氏珠母貝、黑珠母貝及斑珠母貝較具有兩個(gè)位點(diǎn)的珍珠貝屬的企鵝珍珠貝可能具有更古老的進(jìn)化地位。
　　 5S rDNA在七種貝中均檢測(cè)到兩簇?zé)晒庑盘?hào)。在馬氏珠母貝中，位于第10號(hào)染色體長(zhǎng)臂中間區(qū)域；在黑珠母貝中，位于第4號(hào)染色體長(zhǎng)臂中間區(qū)域；在斑珠母貝中，位于第4號(hào)染色體臂的中間區(qū)域；在企鵝珍珠貝中，位于第1號(hào)染色體臂的中間區(qū)域。在齒牡蠣中，位于第2號(hào)染色體臂的中間區(qū)域；在牡蠣染色體中，位于第2