喹烯酮在鯉體內的藥代動力學及殘留研究.pdf

1、喹烯酮為喹噁啉類飼料添加藥物，對豬、雞等動物具有抗病促生長作用。水產養(yǎng)殖業(yè)是重要的食品生產行業(yè)之一。喹烯酮對水產動物具有抗菌促生長，提高成活率的作用，因而具有應用于水產養(yǎng)殖業(yè)的潛能。本課題在建立鯉血漿、組織中喹烯酮及其兩種主要代謝產物定量分析方法的基礎上，系統(tǒng)開展了喹烯酮在鯉體內的藥動學和殘留研究，闡明了喹烯酮在鯉體內吸收與分布規(guī)律，確定喹烯酮在鯉體內的殘留標識物和靶組織，建立鯉混飼喹烯酮的休藥期標準，為喹烯酮在水產動物的應用及其食品安

2、全性控制提供科學依據。 采用液-液萃取與固相萃取技術建立了喹烯酮及其主要代謝物在鯉血漿和組織中的高效液相色譜法，并對方法準確度、精密度、最低定量限及線性等進行了系統(tǒng)考察。結果表明，喹烯酮及其主要代謝物在鯉血漿中的定量限均為8μg/L，當血漿中喹烯酮、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸添加的濃度為8，16，40μg/L時，回收率為74.92～87.71％，日間變異系數為7.71～11.24％。線性方程分別為y=3.5515x+

3、1.7055(r=0.9997)，y=2.2042x+80.166(r=0.9993)，y=3.1988x-7.4783(r=0.9997)。由此可見，準確度和精密度都符合定量分析方法的要求，在所選定的濃度范圍內，線性較好。喹烯酮和脫二氧喹烯酮在鯉肌肉中的定量限為4μg/kg，在魚皮中的定量限為10μg/kg，在魚肝中的定量限為20μg/kg。當肌肉、魚皮和魚肝中分別添加4，8，16μg/kg，10，20，40μg/kg，20，40，8

4、0μg/kg時，回收率為74.06～86.31％。日間變異系數為6.84～14.84％。線性方程分別為喹烯酮在魚肉：y=5.2274x-9.5567(r=0.9996)，喹烯酮在魚皮：y=2.2788x-8.8477(r=0.9993)，喹烯酮在魚肝：y=1.0503x+7.1496(r=0.9992)；脫二氧喹烯酮在魚肉：y=3.8933x-25.092(r=0.9993)，脫二氧喹烯酮在魚皮：y=1.7261x-16.683(r=0

5、.9992)，脫二氧喹烯酮在魚肝：y=0.8662x-5.3659(r=0.9992)。借鑒本實驗室袁宗輝等所建立的3-甲基喹噁啉-2-羧酸在豬、雞和魚可食性組織中高效液相色譜法的國家標準，建立的3-甲基喹噁啉-2-羧酸在鯉的肌肉、魚皮和肝臟中的分析方法的定量限分別為4μg/kg、10μg/kg和10μg/kg，當肌肉、魚皮和魚肝中分別添加4，8，20μg/kg，10，20，50μg/kg，10，20，50μg/kg時，回收率為73.7

6、7～78.54％。日間變異系數為6.28～11.19％。線性方程分別為y=5.6176x-16.201(r=0.9996)，y=1.5754.x+5.0518(r=0.999).y=1.7735x-14.638(r=0.9995)。由此可見，準確度和精密度符合定量分析方法的要求，在所選定的濃度范圍內，線性較好。 將體重約0.4～0.5kg的健康鯉320尾按體重分成兩組，每組160尾，一組單次靜注喹烯酮2.5mg/kgb.w.，另

7、一組口服喹烯酮200mg/kgb.W.。給藥后分別于不同時間采集血樣，樣品處理后HPLC檢測。兩種給藥方式下血漿中均只檢出原形藥物。鯉靜注2.5mg/kgb.w.，藥時數據符合無吸收二室開放模型。分布半衰期t1/2α為0.32h，消除半衰期t1/2β為11.33h，藥時曲線下面積AUC為9.65(μg/mL)·h，表明喹烯酮在鯉體內分布迅速，消除較慢。鯉口灌200mg/kgb.w.，藥時數據符合有吸收一室開放模型，吸收半衰期t1/2α為

8、2.53h，消除半衰期t1/2e為9.90h，藥時曲線下面積AUC為1.72(μg/mL)·h，達峰濃度Cmax為0.08μg/mL，生物利用度F為0.23％，表明鯉口灌喹烯酮后吸收較快，消除較慢，生物利用度低。 將健康鯉190尾連續(xù)飼喂混有75mg/kg喹烯酮的飼料12周后，分別于停藥后4h、12h、24h、48h、72h、5d、7d、10d、14d、21d、28d、35d采樣，各采集點隨機取樣10尾。剖殺后立即采集皮、肌肉、

9、肝臟，后樣品處理用HPLC檢測喹烯酮及其代謝產物在肌肉、皮膚、肝臟中的殘留量。結果表明，停藥后4h、48h和72h，喹烯酮在鯉的皮膚、肝臟和肌肉中的含量已低于定量限；停藥后12h、24h和148h，脫二氧喹烯酮在鯉的肝臟、皮膚和肌肉中的含量即已低于定量限；停藥12h、7d和10d后，3-甲基喹噁啉-2-羧酸在皮膚、肌肉和肝臟中的含量即已低于定量限。本研究結果表明，喹烯酮及其主要代謝物在鯉所有可食性組織中的消除速度以3-甲基喹噁啉-2-羧

10、酸在肝臟中的半衰期最長，故確定喹烯酮在鯉體內的靶組織為肝臟，殘留標識物為3-甲基喹噁啉-2-羧酸。肝臟中，MQCA濃度在停藥后4h為0.045μg/g，停藥后21d即降到LOD以下，其消除半衰期為3.56d。根據毒理學研究，計算MQCA在肝臟中的MRL為1.8μg/g。本研究表明停藥后4h肝臟中MQCA含量就低于1.8μg/g，據此確定喹烯酮在鯉體內的休藥期為零天。 本文所建立的分析方法靈敏度高，檢測周期較短，檢測費用較低，同時