外周血細胞膜上cd55和cd59缺陷對鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿與貧血的意義

1、<p>　　外周血細胞膜上CD55和CD59缺陷對鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿與貧血的意義</p><p>　　作者：阮月芹 韓兆東 李彩玉 陳佳榮 周玉明 孔祥華 </p><p>　　【關鍵詞】 ,,陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿；,貧血；,流式細胞術；,CD55；,CD59；,鑒別診斷 </p><p>　　【摘要】 目的 探討患者外周血細胞膜上CD

2、55和CD59缺陷對鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（parosysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH）與貧血（anemia）的意義。方法 采用熒光素標記的CD55和CD59單克隆抗體，流式細胞術檢測30例正常人、32例再生障礙性貧血（AA）、28例陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）或AAPNH綜合征、38例小細胞低色素性貧血（IDA）、24例巨幼細胞性貧血（MA）、12例自身免疫溶血性貧血（AIHA）患者外

3、周血中紅細胞及中性粒細胞CD55-和CD59-的百分率。結果 CD55-、CD59-正常人紅細胞和中性粒細胞的百分率均＜5%；PNH或AAPNH患者均＞20%；部分再障患者＞5%（均＜15%）。約有40%的小細胞低色素貧血患者CD55-、CD59-紅細胞＞5%（均＜20%）；但中性粒細胞CD55-、CD59-百分率均＜5%。巨幼貧、自身免疫溶血性盆血患者的CD55-、CD59-紅細胞和中性粒細胞均＜5%。結論 利用流式細胞術同時檢測

4、患者外周血中紅細胞和中性粒細胞膜上CD55和CD59缺陷是臨床鑒別診斷PN</p><p>　　【關鍵詞】 陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿；貧血；流式細胞術；CD55；CD59；鑒別診斷 </p><p>　　【Abstract】 Objective To evaluate the significance of deficiency of CD55/CD59 on peripheral b

5、lood cells in differentiation and diagnosis of PNH and anemia.Methods CD55/CD59monoclonal antibodies labeled by fluorescence were used to analyze percentage of CD55/CD59 on erythrocyte and neutrophil in 30 normal subjec

6、ts,32 cases of AA，28 cases of PNH or AAPNH,38 cases of IDA,24 cases of MA and 12 cases of AIHA patients with flow cytometry.Results The percentage of CD55/CD59 on erythrocyte and neutro</p><p>　　【 Key words

7、】 paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,anemia,flow cytometry,CD55,CD59,differentiation </p><p>　　陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）是造血干細胞基因突變的克隆性疾病，其異常血細胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）生成障礙，導致患者血細胞膜上GPI錨定的表面分子CD55、CD59表達明顯減低或缺乏，因而對正常血清中的補

8、體特別敏感而發(fā)生溶血。以往對PNH的實驗室診斷主要依賴酸溶血實驗，此方法僅限于測定紅細胞對補體的敏感度，只有患者外周血受累細胞膜上CD55、CD59缺陷達一定比例時才有可能陽性，故其敏感性受限，使部分PNH患者難以確診。流式細胞術檢測外周血紅細胞和中性粒細胞CD55、CD59是目前大多數(shù)實驗室用來作為診斷陣發(fā)性血紅蛋白尿（PNH）的首選實驗［1］。我院采用熒光素標記的CD55和CD59單克隆抗體，流式細胞術檢測30例正常人、32例再生障

9、礙性貧血（AA）、28例PNH或AAPNH綜合征、38例小細胞低色素性貧血（IDA）、24例巨幼細胞性貧血（MA），12例自身免疫溶血性貧血（AIHA），患者外周血紅細胞及中性粒細胞CD55-和CD59-的百分率，其結果明顯不同?，F(xiàn)將結果報告如下。 </p><p><b>　　1 材料與方法 </b></p><p><b>　　11 材料 </

10、b></p><p>　　111 標本來源：30例健康體檢者作為正常對照組，均排除血液病。其中男17例，女13例，平均年齡26歲；為門診體檢合格者；PNH組13例，其中男7例，女6例，平均年齡36例；AAPNH組15例，其中男9例，女6例，平均年齡33歲；AA組32例，其中男18例，女14例，平均年齡32歲；IDA組38例，其中男20例，女18例，平均年齡35歲；MA組24例，其中男10例，女14例，平均

11、年齡35歲；AIHA組12例，其中男7例，女5例，平均年齡29歲。所有患者均為我院門診及住院病人，均符合血液病的診斷標準［2］。 </p><p>　　112 標本采集：抽取肘靜脈血2 ml置于EDTAk2抗凝管中，輕輕混勻待用。 </p><p>　　113 試劑：CD55FITC和CD59PE熒光單克隆抗體及紅細胞裂解液ImmunoprepTM試劑，IsotonⅢ稀釋液（PBS）均

12、購自法國Immunotech公司。 </p><p>　　114 儀器：美國BeckmanCoulter公司產(chǎn)FC500型流式細胞儀及Coulter QPREP溶血制備儀。 </p><p><b>　　12 方法 </b></p><p>　　121 紅細胞標記及檢測：①每個待測標本均取5 μl EDTAk2抗凝外周血加至含995 μl

13、 PBS的試管中輕輕混勻（200倍稀釋）；②對照管：取20 μl正常人紅細胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55和CD59熒光單克隆抗體；樣品管：取20 μl患者紅細胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55和CD59熒光單克隆抗體。③混勻，室溫避光15 min后加PBS 1 ml，上機檢測。 </p><p>　　122 中性粒細胞標記及檢測：①分別取100 μl抗凝全血于流式專用試

14、管中用ImmunoprepTM試劑溶血，離心10 min（500 r/min）棄上清，用PBS洗3次，加PBS調(diào)整細胞濃度為1×106/μl。②對照管：取100 μl正常人中性粒細胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55或CD59熒光單克隆抗體；樣品管：取100 μl患者中性粒細胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55或CD59熒光單克隆抗體。③混勻，室溫避光15 min后加PBS 1 ml，上機檢測。

15、 </p><p><b>　　2 結果 </b></p><p>　　正常對照組、PNH、AAPNH及IDA、MA、AA、AIHA各組細胞CD55、CD59缺陷結果見表1。 </p><p>　　表1 各組紅細胞及中性粒細胞CD55、CD59檢測結果（略） </p><p><b>　　3 討論 <

16、;/b></p><p>　　近年來的研究已證明補體調(diào)節(jié)蛋白CD55和CD59細胞膜上缺失是PNH發(fā)病的關鍵［3］。由于GPI的合成發(fā)生在造血干細胞水平，所以，在外周血的三系細胞膜上都有CD55和CD59的表達異常。但只有紅細胞和中性粒細胞的CD55和CD59表達更具有特異性和敏感性，且易于檢測［4］。我們的檢測結果表明，30例正常人及24例巨幼細胞性貧血、12例自身免疫溶血性貧血（AIHA）患者外周血紅細

17、胞和中性粒細胞CD55-和CD59-的百分率均＜5%；13例PNH和15例AAPNH綜合征CD55-和CD59-的百分率均＞5%；32例再生障礙性貧血患者中有8例CD55-和CD59-的百分率＞5%，但均＜15%；說明部分再障病人的紅細胞和中性粒細胞中也有PNH樣陰性細胞存在，只是程度較PNH病人輕。提示再障病人也有克隆異常性造血，與呂照紅等［5］報道一致。38例小細胞性貧血患者有15例紅細胞CD55-和CD59-的百分率＞5%，均＜2

18、0%；但中性粒細胞CD55-和CD59-的百分率均＜5%。至于為何小細胞低色素性貧血患者紅細胞會有PNH樣陰性細胞出現(xiàn)而粒細胞正常的原因不清楚。由于缺鐵是造成小細胞低色素性貧血的主</p><p><b>　　參考文獻 </b></p><p>　　1Pilar MH,MA,Julia Almeida,et al.Comparative analysis of dif

19、ferent flow cytometrybased Immunophenotypic methods for the analysis of CD59 and CD55 expression on major peression on major blood cell subsets［J］.Clin Cytometry,2002,50:191201 </p><p>　　2張志南.血液病診斷劑療效標準［M］.第

20、2版.北京：北京科學出版社，1998.8896 </p><p>　　3Norris J,Hall S,Ware RE,et al.Gycosylphosphatidy linositol anchor synthesis in parosysmal nocturnal hemoglobinuria:partial or complete defect in an early step［J］.Blood,1994

21、,83:816820 </p><p>　　4徐從高，張銻，趙睿，等.補體調(diào)節(jié)蛋白在三種干細胞缺陷性貧血中的表達及其意義的研究［J］.中華血液學雜志，1999，20（10）：511514 </p><p>　　5呂照江，張之南，李達，等.從再生障礙貧血患者檢出陣發(fā)性血紅蛋白尿癥異常細胞的觀察［J］.中華血液學雜志，1997，18（10）：521524 </p><p&g