尼羅羅非魚微衛(wèi)星標記和SNPs標記與生長性狀的相關性研究.pdf

1、羅非魚（Tilapia）俗稱“非洲鯽魚”，原產(chǎn)非洲，屬于鱸形目（perciformes）、鱺魚科（cichlidae），共三屬，約100多種。自上世紀50年代，我國先后引進了莫桑比克羅非魚、尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚等品種，至今已成為世界上最大的羅非魚養(yǎng)殖國家。但由于早先引進的羅非魚基礎種群太小，有些還是從第三國引進的，多存在遺傳瓶頸問題；此外，由于羅非魚可以種間雜交并且后代可育，致使我國養(yǎng)殖羅非魚群體的遺傳漸滲或混雜現(xiàn)象比較嚴重，從而導

2、致羅非魚的種質質量急劇下降，出現(xiàn)了生長速度減慢、性成熟年齡提前和繁殖力下降等一系列問題，已大大制約我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的進一步發(fā)展。因此，培育出生長速度快、性狀優(yōu)良的羅非魚品系是我國羅非魚養(yǎng)殖的當務之急。 本論文旨在運用微衛(wèi)星和SNPs分子標記技術，進行進行標記-性狀連鎖分析，尋找影響羅非魚生長性狀的分子標記，為羅非魚選育提供遺傳學依據(jù)，從而加速育種進程、減少育種中的盲目性、提高育種效率，具有十分重要的理論和實踐指導意義。具體如下：

3、 1.與尼羅羅非魚生長相關的微衛(wèi)星DNA標記的篩選和驗證 利用SPSS軟件一般線性模型（GLM）對65個微衛(wèi)星位點與尼羅羅非魚體重等主要生長性狀進行了分析，結果表明，在鷺業(yè)群體中有8個微衛(wèi)星標記（UNH130、UNH183、UNH911、GM558、UNH211、UNH176、UNH914和UNH974）與體重等主要生長性狀顯著或極顯著相關（P<0.05或P<0.01），其中有2個微衛(wèi)星標記（UNH914和UNH974）

4、與番禺群體的體重等主要生長性狀顯著或極顯著相關（P<0.05或P<0.01），1個微衛(wèi)星標記（UNH176）只與體重顯著相關（P<0.05）。對與生長相關的標記進行多重比較，結果找到了對3種性狀有利的基因型或等位基因。 2.羅非魚MC4RcDNA和基因組DNA的克隆黑素皮質素受體-4（Melanocortinreceptor-4，MC4R）是5種已被發(fā)現(xiàn)的黑素皮質素受體家族成員之一，屬于跨膜G-蛋白耦聯(lián)受體超級家族，對于調(diào)節(jié)動物

5、的采食量、體重及能量穩(wěn)態(tài)有著重要的作用。應用RT-PCR和RACE技術首次獲得了尼羅羅非魚MC4R基因cDNA序列，全長為1543bp，其中5'非編碼區(qū)為477bp，3'非編碼區(qū)為82bp，開放閱讀框（ORF）長984bp，共編碼327個氨基酸，其蛋白等電點為8.17，相對分子量為36.7kD；應用基因組步移技術獲得了MC4R基因組DNA序列，全長為2547bp，其中5'側翼序列長為148lbp，3'側翼序列長為82bp，轉錄區(qū)序列長為

6、984bp，只有一個外顯子。 3.羅非魚MC4R基因SNPs的篩選和關聯(lián)分析本研究采用PCR產(chǎn)物直接測序法、PCR-RFLP和CRS-PCR技術對尼羅羅非魚MC4R基因啟動子和外顯子區(qū)域進行了SNPs位點的檢測和分型，結果共檢測到5個SNPs位點（-G1000C、-T974A、C276T、C561T和C708T），其中外顯子上的3個SNPs位點均為同義突變。利用一般線性模型分析5個SNPs位點與尼羅羅非魚生長性狀的關系，結果表明

7、，5個SNPs位點不同基因型之間體重均值差異最大值分別為9.5％、23.2％、14.4％、18.6％和13.5％，沒有達到顯著水平（P>0.05）。將5個SNPs位點不同基因型組合成7種雙倍型（去掉頻率小于3％的組合），關聯(lián)分析表明，在體重和體長這兩個主要生長性狀方面，雙倍型D4與D1、D3和D6存在顯著性差異（P<0.05），雙倍型D2與D3、D6也存在顯著性差異（P<0.05）。因而可以考慮將MC4R基因作為影響羅非魚體重等生長性狀