消化酶、血清和催乳素對奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)的影響.pdf

1、本研究通過對奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)過程中幾個關(guān)鍵的影響因素進行初步摸索，為以后利用乳腺上皮細(xì)胞研究營養(yǎng)因子對乳成分合成的影響奠定基礎(chǔ)。試驗以泌乳期的奶牛乳腺組織為材料，進行了以下研究：
　　1、探討了75％酒精浸泡奶牛乳腺組織塊、不同消化酶及濃度組合消化分離細(xì)胞和胎牛血清（FBS）濃度對奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)的影響。取大小相同組織塊在75%酒精中分別浸泡0s、30s、60s、90s、120s后消化分離細(xì)胞進行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞培養(yǎng)中的污染

2、情況。試驗結(jié)果表明：組織塊在75%酒精中浸泡60s細(xì)胞培養(yǎng)不污染，細(xì)胞生長最好；等量的組織塊分別在0.5%Ⅰ膠原酶、0.5%Ⅱ膠原酶、0.2%Ⅰ膠原酶、0.2%Ⅱ膠原酶、0.25%胰酶+0.5%Ⅰ膠原酶、0.25%胰酶+0.5%Ⅱ膠原酶、0.25%胰酶+0.2%Ⅰ膠原酶、0.25%胰酶+0.2%Ⅱ膠原酶消化2h，獲取細(xì)胞后進行培養(yǎng)，觀察消化過程中組織塊的變化以及原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀況。試驗結(jié)果表明：0.25%胰酶+0.2%Ⅱ膠原酶消化的

3、組織塊生長的乳腺上皮細(xì)胞最多，狀態(tài)最好，后期生長狀態(tài)最佳。配制含0%FBS、5%FBS、10%FBS、15%FBS、20%FBS的培養(yǎng)基，分別用這5種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。試驗結(jié)果表明：含5%與10% FBS的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量無明顯差異（p>0.05）,顯著高于含0%、15%、20%FBS的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量（p<0.05）；
　　2、探討了不同時間添加催乳素(PRL)對奶牛乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)、活性及基因表達的影響。第2代和第3代細(xì)

4、胞分別采用一直不添加PRL、培養(yǎng)24h后添加PRL、一直添加PRL3種方式進行細(xì)胞培養(yǎng)，試驗結(jié)果表明：培養(yǎng)的第2代和第3代細(xì)胞在形態(tài)和活力上均無顯著差異（p>0.05）；第2代細(xì)胞培養(yǎng)24h后添加PRL，αs1-casein、κ-casein、β-casein的基因表達量均顯著高于一直添加PRL或一直不添加PRL組的細(xì)胞（p<0.05）。3種方式培養(yǎng)第3代細(xì)胞時，αs1-casein、κ-casein、β-casein基因表達量均無顯著