小硅藻培養(yǎng)過程中脂類代謝物的變化研究【畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　小硅藻培養(yǎng)過程中脂類代謝物的變化研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí)

2、生物技術(shù) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b>

3、;</p><p><b>　　1 引言1</b></p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)材料和方法1</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料1</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)藻種1</p><p>　　2.1.2 培養(yǎng)基1</p><p>　　2.1.3 儀器和試劑

4、1</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法2</p><p>　　2.2.1 小硅藻的培養(yǎng)2</p><p>　　2.2.2 小硅藻細(xì)胞密度的測(cè)定2</p><p>　　2.2.3 脂類代謝物的提取2</p><p>　　2.2.4 色譜和質(zhì)譜條件2</p><p>　　2.2.5 數(shù)據(jù)

5、處理3</p><p><b>　　3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3</b></p><p>　　3.1 小硅藻生長(zhǎng)周期試驗(yàn)的指紋識(shí)別4</p><p>　　3.2 小硅藻生長(zhǎng)周期代謝指標(biāo)物的定性分析6</p><p>　　3.3 小硅藻周期試驗(yàn)過程中脂類代謝指標(biāo)物的變化9</p><p><b&g

6、t;　　4 討論9</b></p><p><b>　　5 總結(jié)9</b></p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)10</b></p><p>　　摘要：為了研究小硅藻（Nitzschia closterium f. minutissim

7、a）在培養(yǎng)過程中脂類代謝物的變化，利用超高效液相色譜－四極桿－飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS），電噴霧電離源分別在正負(fù)離子模式下，對(duì)小硅藻對(duì)數(shù)期和穩(wěn)定期的脂類代謝物進(jìn)行測(cè)定，并通過SIMCA-P軟件進(jìn)行主成分分析和正交偏最小二乘法辨別分析。結(jié)果表明，從對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期到穩(wěn)定期，三酰甘油及溶血lyso-DGDG、lyso-SQDG均呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)；而PC、MGDG、DGDG、SQDG、PG均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)。這些脂類代謝物的變化，不僅可

8、以用來判別微藻的脂類合成途徑，而且可以科學(xué)確定出脂類、能源積累的階段，從而為微藻的能源開發(fā)提供理論依據(jù)。</p><p>　　關(guān)鍵詞：小硅藻；生長(zhǎng)周期；脂類代謝物；四極桿－飛行時(shí)間質(zhì)譜；超高效液相色譜</p><p>　　Abstract: The aim of this study was to investigate how the lipid metabolites change i

9、n Nitzschia closterium f.minutissima during the growth phase. It was studied by the ultra performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight-mass spectrometry (UPLC-Q-TOF-MS) using electron spraying ionization w

10、ith positive and negative mode, in an effort to find potential metabolite biomarkers during the growth. After the UPLC-Q-TOF analysis, principal components analysis (PCA) and orthogonal projectio</p><p>　　Ke

11、ywords: Nitzschia closterium f.minutissima; growth phase; Lipidomics; Quadrupole-time of flight-mass spectrometry; ultra performance liquid chromatography</p><p><b>　　1 引言</b></p><p>

12、;　　海洋微藻是海洋生態(tài)系統(tǒng)中最重要的自養(yǎng)生物，也是最主要初級(jí)生產(chǎn)者，在海洋生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中起著極其重要的作用。</p><p>　　海洋微藻作為優(yōu)良的天然餌料被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，是海水仔魚、蝦蟹貝等水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物幼體的主要食源，其產(chǎn)生的一些多不飽和脂肪酸（PUFA），特別是EPA，20:5（n-3）和DHA，22:6（n-3），其含</p><p>　　量直接關(guān)系到仔魚及幼

13、體的存活和生長(zhǎng)發(fā)育[1]。海洋微藻中的小硅藻（Nitzschia closterium f. minutissima），也稱小新月菱形藻，在分類上屬于硅藻門，細(xì)胞呈紡錘形。個(gè)體小、繁殖快、脂肪含量高，環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)。小硅藻還含有高度不飽和脂肪酸EPA，可作為理想的保健食品，也可以作為甲殼類、雙殼類和仔魚的餌料從而在海水養(yǎng)殖業(yè)中占有重要地位[2]。</p><p>　　微藻的餌料價(jià)值與許多因素有關(guān)，包括細(xì)胞大小、細(xì)

14、胞壁的可消化程度和細(xì)胞內(nèi)的生化組成特別是脂類的組成和含量，尤以后者最為重要[3,4]。先前的研究認(rèn)為不飽和脂肪酸的含量是影響微藻餌料價(jià)值的最主要因子，但脂類代謝物作為營養(yǎng)物質(zhì)和供能物質(zhì)，對(duì)養(yǎng)殖生物的生長(zhǎng)發(fā)育同樣起決定作用[5]。植物細(xì)胞體內(nèi)含中性脂和極性脂，極性脂一般為海洋微藻的主要脂類，大部分為磷脂和糖脂；中性脂主要為三?；视?，它作為脂肪酸的一種儲(chǔ)存形式，在細(xì)胞分裂、能量代謝、維持膜的穩(wěn)定性、生物合成及其他許多生理過程中起作用，為主

15、要的儲(chǔ)存脂類[6,7]。</p><p>　　目前有研究結(jié)果表明，微藻不同生長(zhǎng)階段（對(duì)數(shù)期和穩(wěn)定期），會(huì)造成細(xì)胞內(nèi)總脂含量和脂肪酸組成的變化[8,9]。而海洋微藻的脂類含量和組成除了決定于藻種本身的遺傳因素外[10]，還受其他環(huán)境條件，如溫度[11,12]、光照[13]，.鹽度[14]等的影響。培養(yǎng)基的種類也會(huì)對(duì)微藻的脂肪酸組成產(chǎn)生影響[15]，特別是培養(yǎng)液中氮源的影響更為顯著[16]。</p>&

16、lt;p>　　由于國內(nèi)外學(xué)者關(guān)于環(huán)境因子對(duì)微藻脂類積累影響的研究主要集中在營養(yǎng)鹽成分、光強(qiáng)、溫度等因素上，而生長(zhǎng)周期內(nèi)脂類的積累，特別是極性脂積累變化的研究較少。因此本文以小硅藻為研究對(duì)象，研究其生長(zhǎng)周期不同階段脂類代謝物的變化，從而科學(xué)確定出脂類、能源積累的階段，為小硅藻的大規(guī)模培養(yǎng)和能源開發(fā)提供理論依據(jù)。</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)材料和方法</b></p>

17、<p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)藻種</p><p>　　小硅藻（Nitzschia closterium f.minutissima），由寧波大學(xué)海洋生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室微藻室提供。</p><p><b>　　2.1.2 培養(yǎng)基</b></p>

18、<p>　　小硅藻的培養(yǎng)使用f/2培養(yǎng)液。其基本配方見表1。</p><p>　　2.1.3 儀器和試劑</p><p>　　ACQUITY超高效液相色譜系統(tǒng)，色譜柱ACQUITY UPLC BEH C8（1.7µm，100mm×2.1mm），Q-TOF Premier高分辨四極桿和飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，MassLynx 4.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)均為美國Waters公司產(chǎn)

19、品；超純水系統(tǒng)（法國Millipore公司）；GXZ智能型光照培養(yǎng)箱（寧波江南儀器廠）；LDZX-50FB高壓蒸汽滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）；TDLSO-2B飛鴿低速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；TP300超聲波清洗機(jī)（北京泰拓公司）；漩渦混合器（上海精科實(shí)業(yè)公司）；W-O系列恒溫水浴鍋、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器均為上海中順生物科技公司產(chǎn)品；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（義烏平華儀器公司）等?？寡趸瘎?,6-二特丁基對(duì)甲酚（BHT，>9

20、9.9%）；色譜純氯仿、甲醇、乙腈、甲酸均為美國Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品；純水來源由超純水系統(tǒng)制備。</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1 小硅藻的培養(yǎng)</p><p>　　用于微藻培養(yǎng)的海水均經(jīng)脫脂棉過濾、煮沸消毒，所有容器均高溫滅菌。培養(yǎng)器皿為3000mL三角燒瓶，培養(yǎng)3個(gè)平行樣。往

21、瓶中加入2000mL培養(yǎng)液（1:1000），200ml藻液，用紙蓋好瓶口，用棉繩扎緊。培養(yǎng)條件是在光照培養(yǎng)箱中，明暗周期為12h:12h；光照方式：日光燈；光照強(qiáng)度約2500lx；溫度為20±2℃。</p><p>　　表1 f/2培養(yǎng)液配方</p><p>　　2.2.2 小硅藻細(xì)胞密度的測(cè)定</p><p>　　每天振搖2次，每天定時(shí)取樣一次，取5.0

22、0mL充分搖勻的藻液，加入1－2滴5%（V/V）的福爾馬林溶液固定，然后取一滴藻液置于血球計(jì)數(shù)板上，在光學(xué)顯微鏡下對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。每一批次做3個(gè)平行樣，取其平均值，然后換算成相應(yīng)的藻細(xì)胞密度（藻細(xì)胞密度=藻數(shù)×104個(gè)/cm3）。作培養(yǎng)時(shí)間（天）與藻細(xì)胞密度的關(guān)系圖，得到小硅藻的生長(zhǎng)曲線（圖1）。</p><p>　　2.2.3 脂類代謝物的提取</p><p>　　取不同生長(zhǎng)

23、階段（對(duì)數(shù)期和穩(wěn)定期）一定體積的藻液，4000－4800r/min離心10min，再用消毒淡水清洗2－3次，經(jīng)冷凍干燥，放入玻璃離心管中低溫（-4℃）保存。將干燥的藻泥采用氯仿:甲醇（v/v，1:1）提取法得到藻中的脂類代謝物。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，干燥后充入氮?dú)?，?20℃貯存待用。所有溶液均加入BHT（50mg/L）。</p><p>　　2.2.4 色譜和質(zhì)譜條件</p><p>　　色譜條

24、件：流動(dòng)相為85乙腈/甲醇（V/V，2:1）:15異丙醇（V/V）溶液（A）和水（B），進(jìn)樣1L，流速0.25mL/min，柱后1:4分流進(jìn)入質(zhì)譜。流動(dòng)相中加入0.1％甲酸和0.05µmol/L 的甲酸鈉。采用梯度洗脫時(shí)洗脫梯度為：B從在8min內(nèi)從初始5％升至70％，在12min內(nèi)從70％升至90％，在8min內(nèi)從90％升至95％，保持14min，在1min升至100％保持3min，最后在1min內(nèi)降到5％然后平衡11min

25、。</p><p>　　質(zhì)譜條件：使用電噴霧電離源（ESI）進(jìn)行分析，脫溶劑的氮?dú)饬魉贋?00L/h，脫溶劑的溫度為250℃，離子源的溫度為120℃，錐孔反吹氮?dú)鉃?。TOF離子飛行的方式為V模式，四極桿的掃描范圍為50－1200。目標(biāo)離子的精確質(zhì)量數(shù)由外標(biāo)物亮腦啡肽進(jìn)行鎖定。正離子模式下，毛細(xì)管電離電壓3.0kV，負(fù)離子模式下，毛細(xì)管電離電壓2.6kV；取樣錐孔電壓為35－80V，碰撞室能量看分析目的不同采用5

26、－60V不等。</p><p>　　2.2.5 數(shù)據(jù)處理</p><p>　　原始數(shù)據(jù)由美國WATERS公司研發(fā)的MassLynx 4.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)采集，再通過MarkerLynx管理系統(tǒng)進(jìn)行處理，從而建立每一樣品對(duì)應(yīng)保留時(shí)間和質(zhì)荷比的峰數(shù)量以及歸一化的峰強(qiáng)度數(shù)據(jù)庫，然后將這個(gè)數(shù)據(jù)庫導(dǎo)入SIMCA-P分析軟件，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正交偏最小二乘法分析（O-PLS-DA）和主成分分析（PCA）。采用

27、MassFragment分析軟件、Human Metabolome Database數(shù)據(jù)庫檢索等多種技術(shù)手段，對(duì)候選生物標(biāo)記物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。</p><p>　　圖1 3個(gè)平行樣的小硅藻生長(zhǎng)曲線</p><p><b>　　3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果</b></p><p>　　3.1 小硅藻生長(zhǎng)周期試驗(yàn)的指紋識(shí)別</p><p>　

28、　為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠和統(tǒng)計(jì)正確，減小誤差，每個(gè)小硅藻樣品重復(fù)進(jìn)樣三次。為了得到每一個(gè)樣品的信息，對(duì)樣品在正負(fù)離子模式下進(jìn)行液相色譜－質(zhì)譜（LC-MS）分析。每個(gè)樣品進(jìn)樣數(shù)為六次，分別是電噴霧正離子模式分析三次和負(fù)離子模式分析三次。利用UPLC-Q-TOF-MS分析系統(tǒng)，使小硅藻的脂類代謝物在液相色譜柱上發(fā)生分離（圖2）。</p><p>　　圖2 小硅藻樣品的總離子流圖。A. ESI-掃描；B. ESI+掃描&l

29、t;/p><p>　　經(jīng)MarkerLynx處理，小硅藻樣品可以分別得到8398（正離子模式）、3067個(gè)（負(fù)離子模式）信號(hào)峰，將這些信號(hào)峰通過歸納處理，進(jìn)行主成分分析，得到５組小硅藻樣品在正負(fù)離子模式下的PCA得分圖（圖3）。圖上每一個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)樣品，每組樣品用圈隔開以方便觀察，從圖中可以直觀在看到不同生長(zhǎng)時(shí)期小硅藻樣品的差異性[17]。</p><p>　　根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，通過SIMCA-

30、P分析軟件對(duì)樣品進(jìn)行正交偏最小二乘法（O-PLS-DA）分析。圖4是基于正交偏最小二乘法獲得的第一組（7天后和9天后收集的為第一組）和第二組（17天后、24天后和27天后收集的為第二組）小硅藻樣品數(shù)據(jù)分析結(jié)果的S載荷圖（S-loading plot）。在S載荷圖上，每一個(gè)點(diǎn)為一個(gè)數(shù)據(jù)對(duì)，其表示了該物質(zhì)的質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間。中間的橫軸表示可變量，數(shù)據(jù)對(duì)離0越遠(yuǎn)，說明樣品的差異性越大?？v軸表示每個(gè)樣品間的相關(guān)性，數(shù)據(jù)對(duì)離0越遠(yuǎn)，說明樣品的相關(guān)

31、性越好。所以，圖中兩端的數(shù)據(jù)對(duì)表示了樣品中可信度最高的特征離子。然后根據(jù)變異權(quán)重參數(shù)（VIP）在正負(fù)離子模式下分別提取前20個(gè)特征離子（表2）作為潛在標(biāo)志物進(jìn)行定性分析。</p><p>　　圖3 小硅藻前二主成分的PCA得分圖。A. 正離子掃描模式ESI+ scan；B. 負(fù)離子掃描模式ESI- scan；</p><p>　　1. 7天后收集小硅藻樣品，2. 9天后收集，3. 17天后

32、收集，4. 24天后收集，5. 27天后收集。</p><p>　　圖4 基于正偏交最小二乘法獲得的第一組和第二組小硅藻樣品的S-載荷圖。</p><p>　　A. 正離子模式下S-載荷圖；B. 負(fù)離子模式下S-載荷圖</p><p>　　表2 對(duì)第一組和第二組小硅藻樣品進(jìn)行正偏交最小二乘法分析后相對(duì)第二組比較獲得的潛在生物標(biāo)志物</p><p&

33、gt;　　#：第一組為小硅藻7天和9天后取樣樣品；第二組為小硅藻17天，24天和27天取樣樣品。</p><p>　　3.2小硅藻生長(zhǎng)周期代謝指標(biāo)物的定性分析</p><p>　　根據(jù)以上提取出的前20個(gè)變量離子的m/z比值的精確質(zhì)量數(shù)（質(zhì)量相對(duì)誤差小于5ppm）得到其可能的元素組成，在互聯(lián)網(wǎng)上提供的免費(fèi)LIPID MAPS庫（http://www.lipidmaps.org），HMDB庫

34、（http://www.hmdb.ca）和METLINE庫（http://metlin.Scripps.edu）里進(jìn)行搜索，與標(biāo)準(zhǔn)品的色譜行為和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)進(jìn)行最終定性。</p><p>　　對(duì)于前20個(gè)變量離子中的絕大部分離子為三酰甘油（TAG）、二酰甘油硫代糖脂（SQDG）、硫代溶血硫代糖脂（lyso-SQDG）和單半乳糖甘油二酯（MGDG），由于無法買到所有的標(biāo)準(zhǔn)品，主要根據(jù)其m/z比值的精確質(zhì)量數(shù)

35、和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，根據(jù)脂類物質(zhì)的質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行最終定性。比如圖2中保留時(shí)間為34.44min、ESI+模式下m/z為825.6958代謝物離子，根據(jù)正離子掃描模式下的TIC圖中對(duì)應(yīng)保留時(shí)間處的質(zhì)譜（圖5），可確定出此分子對(duì)應(yīng)的[M + H]+ （m/z 803.7138）、[M + Na]+ （m/z 825.6958）、[M+NH4]+ （m/z　820.6786），故此標(biāo)志物的分子量為802.7060，而其 [M + H]+ 的精確

36、m/z為803.7138。誤差允許0.01Da范圍內(nèi)在HMDB庫中進(jìn)行檢索，可得到8個(gè)可能的吻合物，其中有6個(gè)為三酰甘油。這些物質(zhì)有著不同的?；舅峤M成，在高能量下會(huì)產(chǎn)生不同的碎片離子，所以進(jìn)一步考察目標(biāo)代謝物的二級(jí)質(zhì)譜行為（圖6）：正離子模式下產(chǎn)生m/z 221和m/z 219，m/z 237和m/z 239，m/z 549和m/z 54</p><p>　　圖5 保留時(shí)間34.44min處的ESI-MS圖&

37、lt;/p><p>　　再舉個(gè)例子，比如圖2中保留時(shí)間為19.46min、ESI+模式下m/z 為795.4997代謝物離子，根據(jù)正、負(fù)離子掃描模式下的TIC圖中對(duì)應(yīng)保留時(shí)間處的質(zhì)譜（圖7），可確定出此分子對(duì)應(yīng)的[M + Na]+ (m/z 795.4997)、[M-H]- (m/z 771.5066)和[M+HCOOH-H]- (m/z 817.5101)，故此標(biāo)志物的分子量為772.5099。誤差允許5ppm范圍

38、內(nèi)在METLINE庫中進(jìn)行檢索，可得到1個(gè)可能的吻合物（18:3/18:4 MGDG）。進(jìn)一步考察目標(biāo)代謝物的二級(jí)質(zhì)譜行為（圖8）：正離子模式下m/z 243的存在預(yù)示此物質(zhì)有一個(gè)半乳糖頭部，同時(shí)</p><p>　　并未找到405的離子，說明物質(zhì)確實(shí)是MGDG[19]，負(fù)離子模式下豐度最強(qiáng)的為m/z251.1947和301.2126，正離子模式下豐度最強(qiáng)的為m/z493.2767和543.2953（為MGDG脂

39、肪?；鶊F(tuán)作為羧酸的中性丟失而產(chǎn)生的離子），表明這個(gè)單半乳糖甘油二酯的兩個(gè)脂肪?；謩e為16:2和20:5，而正離子模式下m/z493.276離子信號(hào)比m/z543.2953離子信號(hào)強(qiáng)，根據(jù)在各碰撞能量（5-80V）碰撞下[M+Na-R1COOH]+的強(qiáng)度總是高于[M+Na-R2COOH]+-的強(qiáng)度的規(guī)律[19]，得出sn-1是20:5而sn-2位是16:2，最終可確定此代謝物為MGDG（20:5/16:2）。</p>&

40、lt;p>　　圖6 [M + Na]+ (m/z 825.6958)的ESI-MS2圖</p><p>　　圖7 保留時(shí)間19.46min處的ESI-MS圖</p><p>　　根據(jù)以上定性過程，剔除重復(fù)的信息（正負(fù)離子模式下均排在前20位的同一物質(zhì)，同一離子模式不同離子化狀態(tài)的同一物質(zhì)），在獲得的潛在生物標(biāo)志物中，最終鑒定出2種MGDG，1種lyso-DGDG，1種PC，3種SQD

41、G，3種lyso-SQDG、2種PG、7種TAG，另外9種化合物未鑒定出。（表2）</p><p>　　圖8 [M + Na]+ (m/z 795.4997)和[M+HCOOH-H]- (m/z 817.5101)的ESI-MS2圖</p><p>　　3.3 小硅藻周期試驗(yàn)過程中脂類代謝指標(biāo)物的變化</p><p>　　表2中相關(guān)系數(shù)均是相對(duì)2組的結(jié)果，正值表示與

42、第二組樣品正相關(guān)即生長(zhǎng)過程中該代謝物呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，而負(fù)值表示與第一組樣品正相關(guān)即生長(zhǎng)過程中該代謝物呈現(xiàn)減少的趨勢(shì)?？梢姡瑥姆植稼厔?shì)看，隨時(shí)間的增長(zhǎng)，三酰甘油及溶血lyso-DGDG、lyso-SQDG均呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)；而PC、MGDG、DGDG、SQDG、PG均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)。</p><p><b>　　4 討論</b></p><p>　　比較各光合膜脂分子?；?/p>

43、可以發(fā)現(xiàn)，所有光合膜脂分子的sn-2位均為C16的脂肪酸，此類由位于質(zhì)體的原核生物合成途徑合成。同時(shí)，TAG第三條鏈主要是C16，也說明其主要是通過植物原核途徑合成的。 </p><p>　　從對(duì)數(shù)期到穩(wěn)定期，極性脂（主要是光合膜脂）含量均下降，而中性脂（TAG）的含量明顯升高，說明在這個(gè)過程中光合作用效率降低，多余的能量轉(zhuǎn)化成三酰甘油儲(chǔ)存起來。細(xì)胞生長(zhǎng)過程中，后期由于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗、代謝產(chǎn)物的生成使培養(yǎng)環(huán)境不利

44、于自身生長(zhǎng)，溶血lyso-DGDG、lyso-SQDG的增長(zhǎng)可能與清除體內(nèi)自由基有關(guān)。</p><p><b>　　5 總結(jié)</b></p><p>　　本實(shí)驗(yàn)以海洋微藻小硅藻（Nitzschia closterium f.minutissima）為研究材料，以脂類代謝物為主要的研究對(duì)象，用以上建立的微藻光合作用膜脂的LC-MS分析方法作為基本分析手段，在小硅藻生長(zhǎng)周

45、期過程中，對(duì)小硅藻的脂類代謝物的變化規(guī)律進(jìn)行研究。結(jié)果表明，從對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期到穩(wěn)定期，三酰甘油及溶血lyso-DGDG、lyso-SQDG均呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)；而PC、MGDG、DGDG、SQDG、PG均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]蔣霞敏,鄭亦周.14種微藻總脂含量和脂肪酸組成研究[J].水生生物學(xué)報(bào),2003,2

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