禽類隱孢子蟲調(diào)查及防治抗體研制.pdf

1、寄生于禽類的隱孢子蟲有效種為3個即C.meleagridis，C.baileyi，C.galli，其中C.meleagridis作為人隱孢子蟲病的第三大感染種類已引起廣泛的關注。基于此，作者對河南省部分地區(qū)的禽類（鴕鳥、鴨、雞、鵪鵓）進行了隱孢子蟲流行病學調(diào)查，掌握了其流行特點。并利用收集獲得的雞源C.baileyi卵囊進行了卵黃抗體的制備與鑒定研究，為進一步開展應用抗隱孢子蟲特異性IgY抗體進行隱孢子蟲病的治療與診斷提供基礎。

2、　　 2006年6月～2007年7月，對河南地區(qū)6個鴕鳥養(yǎng)殖場、8個鴨場、8個規(guī)?；u場和37個中小規(guī)模雞養(yǎng)殖戶、47個鵪鶉養(yǎng)殖場的禽類進行了調(diào)查。糞便樣品中隱孢子蟲的檢測用飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法進行。結(jié)果顯示鴕鳥隱孢子蟲感染率為1.7％(14/829)，鴨隱孢子蟲陽性率為16.31％(92/564)，蛋雞、種雞隱孢子蟲感染率為10.57％(163/1542)、肉雞感染率為3.17％(15/473)，鵪鶉隱孢子蟲感染率為1

3、3.15％(239/1818)。統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析表明幼齡鴕鳥和雛鴨較易感染隱孢子蟲，對于雞，0～31、31～60d的雛雞和121～180d初產(chǎn)蛋雞感染率相對較高，育成雞(60～120d)和產(chǎn)蛋雞（180d以后）的感染率相對較低。根據(jù)形態(tài)學鑒定，寄生于鴕鳥、鴨、雞的隱孢子蟲為C.baileyi，而寄生于鵪鵓的隱孢子蟲除了C.baileyi外，尚感染有C.meleagridis。
　　 利用實驗室擴增后的雞源C.baileyi卵囊，以改

4、進的Sheather蔗糖梯度離心法提純卵囊，低速離心結(jié)合濾膜微濾除菌后，通過反復凍融和超聲波處理的全卵囊抗原，以福氏完全和非完全佐劑制備免疫抗原，設定4種免疫程序，免疫5月齡開產(chǎn)健康母雞。結(jié)果顯示首免、二免劑量均為5×107個/只，免疫間隔6周，2次免疫的第一組，每次免疫劑量均為1×107個/只，免疫間隔15～20天，4次免疫的第三組不能取得好的免疫效果，應用免疫抗原量梯度增加的免疫方法的第二組，取得了滿意的抗體水平，一免、二免抗原量分

5、別為1×107個/只，2×107個/只，三免、四免抗原量均為3×107個/只，五免、六免抗原量均為5×107個/只，每次免疫間隔15～20d，共免6次。采用間接ELISA法和免疫熒光法對獲得的卵黃抗體進行初步鑒定，其具有隱孢子蟲屬特異性。以水稀釋-鹽析法純化本次實驗獲得的IgY抗體，經(jīng)SDS-PAGE分析后，卵黃抗體未提純前呈現(xiàn)12條以上清晰蛋白條帶，主要的有136KDa、74KDa、62KDa、49KDa和33KDa蛋白條帶，提純后的