利用SSR標(biāo)記和大配子體構(gòu)建馬尾松遺傳圖譜.pdf

1、本文以160粒馬尾松胚乳為作圖材料，利用235對(duì)SSR引物，構(gòu)建了馬尾松的遺傳連鎖框架圖譜，主要研究成果如下：
　　 1、通過(guò)比較CTAB和SDS兩種方法，發(fā)現(xiàn)SDS法比較適合馬尾松胚乳DNA提取。
　　 2、確定了適合馬尾松胚乳的最佳SSR反應(yīng)體系：10μL反應(yīng)體系中，模板DNA為15ng，引物濃度為0.1μM，dNTP濃度為0.3mM，Mg2+濃度為2.0mM，Taq酶濃度為1.0U。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃，4min；9

2、4℃，30s； Tm-5℃，15s；72℃，30s:，40cycles；72℃延伸30min；4℃保溫。擴(kuò)增產(chǎn)物在8％PAGE膠上分離檢測(cè)，銀染法顯帶。試驗(yàn)證明擴(kuò)增效果好，條帶豐富，穩(wěn)定性強(qiáng)，重復(fù)性好。
　　 3、利用篩選出的多態(tài)SSR引物30對(duì)，對(duì)160個(gè)胚乳個(gè)體進(jìn)行檢測(cè)，獲得分離位點(diǎn)97個(gè)，平均1.62位點(diǎn)/引物。
　　 4、連鎖圖譜構(gòu)建用FsLinkageMap2.0軟件。通過(guò)對(duì)86個(gè)標(biāo)記的連鎖關(guān)系進(jìn)行分析，獲得一