PCR檢測螺類感染廣州管圓線蟲方法的研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高、交通日益便捷及飲食習慣的改變，使得我國近幾年來食源性疾病的病例增長迅猛，人獸共患的疾病種類也日益增多，廣州管圓線蟲病便是其中之一。自20世紀90年代以來我國先后在北京、溫州、云南和福州等地發(fā)生多起廣州管圓線蟲病小范圍的暴發(fā)流行，其中又以2006年夏秋季北京病例多達200多例為甚，引起市民的恐懼和相關方面的高度重視。 本文綜合介紹了廣州管圓線蟲病的研究現狀、中間宿主的種類及其診斷技術的研究現狀。針對目前廣州

2、管圓線蟲感染的中間宿主螺類的特點，本研究鑒定了來自廣州、廣西及上海等地的管圓線蟲并建立了針對廣州管圓線蟲的PCR、實時熒光PCR的特異性檢測方法，其具有檢測時間短、靈敏度高，特異性強等特點，并對幾種殺滅福壽螺的藥物進行了實驗室初步研究。本文為貝類鮮活產品等體內的廣州管圓線蟲檢測及野外帶疫普查提供了良好的診斷方法，對食品安全、預防和控制廣州管圓線蟲病暴發(fā)和流行具有重要的意義。研究結果如下： 1.蟲種鑒定：本試驗以通用引物XZ1、N

3、C2為引物，分別對從廣西、廣州、福州及上海等地搜集的地方種管圓線蟲提取的DNA作為模板，擴增ITS-2，通過對溫度、引物濃度等條件進行優(yōu)化，獲得約250bp的片段，后經測序驗證，結果與Genbank上廣州管圓線蟲序列相似性達99.5％，所以判斷以上幾個地方的管圓線蟲均為廣州管圓線蟲。 2.本試驗首次建立了常規(guī)PCR方法檢測中間宿主福壽螺、非洲大蝸牛、白肉蝸牛等體內的廣州管圓線蟲的方法。根據Genbank上廣州管圓線蟲大亞基基因序

4、列設計一對廣州管圓線蟲的特異性引物，優(yōu)化了各種PCR反應條件，結果顯示此方法具有較高的特異性且靈敏度明顯高于組織勻漿法，達到快速、靈敏地檢測廣州管圓線蟲中間宿主的效果。 3.本研究首次成功建立了TaqMan探針檢測螺類感染廣州管圓線蟲的實時熒光PCR檢測方法，選擇保守區(qū)域設計TaqMan探針及其引物，標記發(fā)光基團和淬滅基團，對影響PCR反應的一系列因素進行了優(yōu)化，結果建立的熒光PCR方法的靈敏度遠遠高于常規(guī)PCR檢測方法，具有時