土壤鉛修復(fù)菌的鑒定及原生質(zhì)體融合技術(shù)選育.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、土壤鉛污染已嚴重威脅人類的健康，利用微生物修復(fù)鉛是目前治理土壤鉛污染的方法之一，原生質(zhì)體融合技術(shù)可以選育出優(yōu)良的菌種。因此本研究將一株耐鉛能力強的菌(CGMCC13007)和一株修復(fù)土壤鉛污染能力強的菌(CGMCC5515)進行原生質(zhì)體融合，目的是篩選出同時耐鉛能力強和修復(fù)土壤鉛能力強的融合子。
　　本論文首先對這兩株菌進行菌種鑒定:通過培養(yǎng)特征與菌體形態(tài)觀察、生理生化特性鑒定和遺傳特性鑒定綜合分析出兩株菌分別為蠟樣芽胞桿菌（Ba

2、cillus cereus）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。然后確定原生質(zhì)體的制備及融合條件:溶菌酶濃度為4mg/mL，酶解溫度為36℃，酶解時間為60min，PEG6000濃度為36％，融合條件為冰浴5min，原生質(zhì)體形成率可分別達68％和73％，再生率分別達23.73％和58.23％。融合子的篩選條件為:初篩用含1mg/L慶大霉素、1mg/L利福平和1mg/L2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的高滲再生培養(yǎng)

3、基，復(fù)篩用含1800mg/L鉛的高滲再生培養(yǎng)基。最終獲得四株融合子。將四株融合子接種至含1mg/L慶大霉素、1mg/L利福平、1mg/LTTC和1800mg/L鉛的營養(yǎng)瓊脂平板上，但均未傳代成功，原因有可能這四株融合子均為異核體。
　　最后確定了白菜種子發(fā)芽的最佳土壤含鉛濃度為800mg/kg，發(fā)芽率為50％;用這兩株菌分別浸種后在含鉛土壤上的發(fā)芽率分別為65％和78.5％;石墨爐原子吸收法分析出兩株混合菌使含鉛500mg/kg土

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