醫(yī)院感染微生物學

1、醫(yī)院感染微生物學監(jiān)測,涇源縣人民醫(yī)檢驗科段小娟,醫(yī)院感染監(jiān)測的定義,醫(yī)院感染監(jiān)測是指長期地、系統地、有計劃地、主動地觀察一定人群中醫(yī)院感染發(fā)生和分布以及影響醫(yī)院感染的各種因素，對監(jiān)測資料進行定期的整理分析，確定其分布動態(tài)和變化趨勢，向有關人員和單位發(fā)送、反饋，并及時采取防治對策和措施，同時對其防治效果和經濟效益作出評價，不斷改進，以期達到控制和降低醫(yī)院感染的目的。,醫(yī)院感染監(jiān)測的內涵,要有一個長期的監(jiān)測計劃，連續(xù)系統地收集資料定期匯

2、總并經分析和解釋所收集的資料，使之成為有意義的材料，向有關人員或單位反饋或報送準確地確定醫(yī)院感染的各種問題，以便有針對性地采取控制措施對各種監(jiān)測方法和手段要進行評價要確定診斷標準,醫(yī)院感染監(jiān)測的目的,醫(yī)院感染監(jiān)測是醫(yī)院感染控制的先行，醫(yī)院感染控制水平是反映醫(yī)療技術水平的重要評價指標之一。目的是為了控制醫(yī)院感染的各種危險因素，降低醫(yī)院感染的各種危險因素、降低醫(yī)院感染的發(fā)生率，保證和提高醫(yī)療質量和醫(yī)療安全,醫(yī)院感染監(jiān)測簡史,醫(yī)院感染

3、監(jiān)測源于19世紀中葉，產褥熱發(fā)生原因的調查研究醫(yī)院感染監(jiān)測的系統發(fā)展始于20世紀50年代歐美MRSA(耐甲氧西林金黃色葡萄球菌)感染的流行美國在60年代開始成立醫(yī)院感染控制委員會，在醫(yī)院中開展空氣和環(huán)境的細菌學監(jiān)測,醫(yī)院感染監(jiān)測的組織系統,院長領導下的醫(yī)院感染管理委員會醫(yī)院感染科科室醫(yī)院感染管理小組組成三級醫(yī)院感染監(jiān)測管理網絡,監(jiān)測內容,醫(yī)院空氣微生物學監(jiān)測醫(yī)務人員手的微生物學監(jiān)測物體表面微生物學監(jiān)測使用中的消毒劑的微生

4、物學監(jiān)測壓力蒸汽和干熱滅菌效果的微生物學監(jiān)測醫(yī)療器械消毒效果的微生物學監(jiān)測,監(jiān)測的時機,定期常規(guī)監(jiān)測 １次／１－３個月針對性監(jiān)測 醫(yī)院感染暴發(fā)流行時環(huán)境變動時監(jiān)測 新環(huán)境,基本原則,嚴格執(zhí)行國家統一標準方法2012《醫(yī)療機構消毒技術規(guī)范》,監(jiān)測前準備,檢驗科的準備 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿，一次性使用采樣棉試子，一次性無菌規(guī)格板，無菌生理鹽水，壓力蒸汽消毒鍋，生物培養(yǎng)箱等臨床科室的準備

5、 申請單的填寫，無菌采樣包（棉試子，剪刀，鑷子）醫(yī)務人員六步法洗手，記錄筆，標簽。,申請單的填寫,環(huán)境類別；采樣時間；科室；采樣人員；平皿規(guī)格；監(jiān)測項目；監(jiān)測目地；房號。醫(yī)務人員；采樣面積；樣本號。品名；批號；商標。,培養(yǎng)皿,倒置拿培養(yǎng)皿，在底部標記1：防止凝結在皿蓋上的水蒸氣流到培養(yǎng)基表面導致染菌！2：有利于菌種利用培養(yǎng)基營養(yǎng)，加快生長速度,空氣微生物學監(jiān)測,（采用潔凈技術，未采用潔凈技術）采集頻率采樣時間沉降法或浮游菌

6、法采集（參照GB50333要求進行監(jiān)測）,潔凈手術室及其他潔凈室,沉降法或浮游菌法采集靜態(tài)：室內設施及功能齊備，空調凈化系統正常運行，但無人員的狀態(tài)。潔凈系統自凈后與從事醫(yī)療活動前或懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關時地面上或不高于地面0.8m的任意高度30min,放置培養(yǎng)皿,手術潔凈度級別不同，放置個數不同,潔凈手術室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法,局部百級周圍千級,潔凈手術室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法,局部千級周圍萬級,潔凈手術室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法,局部萬級

7、周圍十萬級,潔凈手術室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法,局部十萬級,潔凈手術室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法,潔凈度三十萬級設置個點面積>30m2布放4點,面積<30m2布放2點,層流手術室沉降法空氣監(jiān)測采樣布點數,,潔凈手術室靜態(tài)空氣監(jiān)測方法,培養(yǎng)應必須設２次空白對照第一次對照：為培養(yǎng)皿照，每監(jiān)測批次中?。眰€培養(yǎng)做對比試驗，培養(yǎng)皿不打開直接培養(yǎng)，用于檢測培養(yǎng)皿是否合格第二次對照：為操作過程對照，每室或每區(qū)?。眰€對照皿，對操作過程做對照試驗，模擬微

8、生物檢測操作過程，但培養(yǎng)皿打開后應立即封，用于檢測培養(yǎng)皿操作過程是否合格。注意：兩次對照結果都必須為陰性，整個操作應符合無菌要求,潔凈手術室的等級標準,注意事項,靜態(tài)測試時，室內測試人員不能多于２人采樣時應遵守無菌操作原則采樣后２小時內將培養(yǎng)皿置培養(yǎng)箱培養(yǎng)標明培養(yǎng)皿的編號化驗單上必須注明手術室的級別必須設兩次空白對照采取一功措施防止人為對樣品的污染,未采用潔浄技術凈化空氣的房間（參照GB15982要求進行監(jiān)測）,沉降法

9、消毒或規(guī)定通風換氣后與從事醫(yī)療活動前采樣前，關閉門窗，在無人走動的情況下，靜止10min后采樣 距地面0.8-1.5m距墻壁１m,放置點,室內面積＞３０m2 室內面各＜３０m2,檢測方法,將普通營養(yǎng)瓊脂平皿（Φ90mm）放置各采樣點，采樣高度為距地面0.8m～1.5m；采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露規(guī)定時間后蓋上平皿蓋及時送檢。 將送檢平皿置36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)48h,計數菌落數。若懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關時

10、，進行目標微生物的檢測,結果計算,1.沉降法按平均每皿的菌落數報告：=cfu/（皿．暴露時間）沉降法計算公式 50000×N空氣細菌總數（cfu/m3）= ATA——平板面積，cm2。T——平板暴露時間，min。N——平均菌落數。若平板直徑9cm，暴露時

11、間5min，則計算式為：空氣細菌總數（cfu/m3）=157N2.浮游菌法計算公式 采樣器各平皿菌落數之各(cfu)空氣中菌落總數( cfu/m3)= x1000 采樣速率(L/min)

12、x采樣時間(min),,,,,不得檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌等致病菌,,潔凈手術部（室）和其他潔凈場所，空氣中的細菌菌落總數要求應遵循GB50333．非潔凈手術部（室）、非潔凈骨髓移植病房、產房、導管室、新生兒室、器官移植病房、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房、血液病病區(qū)空氣中的細菌菌落總數≤4cfu／（15ｍｉｎ·直徑9ｃｍ平皿）。兒科病房、母嬰同室、婦產科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室

13、、輸血科、消毒供應中心、血液透析中心（室）、急診室、化驗室、各類普通病室、感染疾病科門診及其病房空氣中的細菌菌落總數≤4cfu/(5min·直徑9cm平皿)。,醫(yī)護人員手樣細菌總數測定,采樣時間：在接觸病人前或從事醫(yī)療活動前進行采樣六步洗手法,采樣方法：,被檢人五指并攏,用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30 cm2),并隨之轉動采樣棉拭子,剪去操作者手接觸部位,將棉

14、拭子投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內,立即送檢.,,操作：將樣品管充分混合后，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌培養(yǎng)皿中（共接種2只平皿，做平行樣），加入熔化的450C滅菌營養(yǎng)瓊脂15ml混合后，待其凝固，翻轉平板置370C培養(yǎng)48h作菌落計數。,結果計算,N×稀釋倍數細菌總數(cfu/cm2)= 面積（cm2）N——平均菌落數&#

15、215;10——換算成10ml，÷60——30cm2/手,,,衛(wèi)生手消毒，監(jiān)測的細菌菌落總數應≤10cfu/ cm2。 外科手消毒，監(jiān)測的細菌菌落總數應≤5cfu/cm2,物體表面的監(jiān)測,采樣時間 消毒處理后4h內進行采樣采樣方法： 棉拭子采樣法 涂抹法,物體表面的監(jiān)測,拭子采樣法：采樣面積：被采表面＜100cm2 時,取全部表面；被采表面&

16、gt;100cm2時,取100cm2。采樣方法：用5×5cm2的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面。用浸有含相應中和劑的無菌采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉動棉拭子，連續(xù)采樣1～4個規(guī)格板面積，剪去或折去手接觸部份，棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管中送檢，門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣,物體表面的監(jiān)測,檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振搖80次，用無菌吸管吸取1.0

17、ml接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內加入已溶化的45～480C的營養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固后置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48小時，計數菌落數。,物體表面的監(jiān)測,結果報告（菌落總數）計算公式：物體表面細菌菌落總數(cfu/cm2)=其中小件物品以cfu/件報告結果,,平皿上菌落的平均數x稀釋倍數,采樣面積(cm2 ),,潔凈手術部、其他潔凈場所，非潔凈手術部（室）、非潔凈骨髓移植病房、產房、導管室

18、、新生兒室、器官移植病房、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房、血液病病區(qū)等；物體表面細菌菌落總數≤5cfu/ cm2。 兒科病房、母嬰同室、婦產科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室、輸血科、消毒供應中心、血液透析中心（室）、急診室、化驗室、各類普通病室、感染疾病科門診及其病房等；物體表面細菌菌落總數≤10cfu/ cm2。,使用中消毒液細菌總數監(jiān)測,采樣方法： 用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品，在無菌條件下加入9.0ml含相應中和劑的采

19、樣液中混合后送實驗室檢驗（采樣液可以用N.S代）。,,：將樣品管充分混合后，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌培養(yǎng)皿中（共接種2只平皿，做平行樣），加入熔化的40-45 ℃滅菌營養(yǎng)瓊脂15ml混合后，待其凝固，翻轉平板置37 ℃培養(yǎng)48-72h作菌落計數。,,醇類與酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑、含碘消毒劑和過氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰、季銨鹽類消毒劑用含0.3%吐溫80和0.3%卵磷脂中和劑，

20、醛類消毒劑用含0.3%甘氨酸中和劑，含有表面活性劑的各種復方消毒劑可在中和劑中加入吐溫80至3%；也可使用該消毒劑消毒效果檢測的中和劑鑒定試驗確定的中和劑,結果計算,細菌總數(cfu/ml)=N×10N——平均菌落數×10——換算成10ml，即1ml采樣量，結果按每ml報告。消毒液染菌量（cfu/ml）=平均每皿菌落數×10×稀釋倍數,結果判斷,使用中滅菌用消毒液：無菌生長；使用中皮膚黏膜

21、消毒液染菌量：≤10cfu/ml，其他使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml。,壓力蒸汽滅菌效果的監(jiān)測,方法:物理監(jiān)測法、化學監(jiān)測法、生物監(jiān)測法和B—D測試,標準生物測試包的制作方法,標準指示菌株：嗜熱脂肪桿菌芽孢，菌片含菌及抗力符合國家有關標準； 標準測試包的制作：由16條41cm×66cm的全棉手術巾制成。制作方法：將每條手術巾的長邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊放，制成23cm×23cm×15

22、cm的測試包 標準生物測試包或生物PCD的制作方法：將至少一個標準指示菌片裝入滅菌小紙袋內或至少一個自含式生物指示劑，置于標準試驗包的中心部位即完成標準生物測試包或生物PCD的制作,培養(yǎng)方法：,經一個滅菌周期后，在無菌條件下取出標準試驗包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經56℃±1℃培養(yǎng)7d（自含式生物指示物按產品說明書執(zhí)行），觀察培養(yǎng)結果；,結果判定,陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，試驗組培養(yǎng)陰性，

23、判定為滅菌合格。陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，試驗組培養(yǎng)陽性，則滅菌不合格；同時應進一步鑒定試驗組陽性的細菌是否為指示菌或是污染所致。自含式生物批示物不需要做陰性對照,干熱滅菌的效果監(jiān)測,方法:物理監(jiān)測法、化學監(jiān)測法、生物監(jiān)測法,標準生物測試管的制作方法,標準指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢，菌片含菌及抗力符合國家有關標準 標準生物測試管的制作方法：將標準指示菌片分別裝入滅菌中試管內（1片/管）監(jiān)測方法：將標準生物測試管，

24、置于滅菌器最難滅菌的部位，即滅菌器與每層門把手對角線內、外角處放置2個含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關好柜門，經一個滅菌周期后，待溫度降至80℃時，加蓋試管帽后取出試管。并設陽性對照和陰性對照,培養(yǎng)方法,在無菌條件下，加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5mL/管），36℃±1℃培養(yǎng)48h，觀察初步結果，無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第7d,結果判定：,陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，若每個指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為滅菌合格；若陽性

25、對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，而指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合格；對難以判定的肉湯管，取0.1mL接種于營養(yǎng)瓊脂平板,用滅菌L棒或接種環(huán)涂勻,置于36℃±1℃培養(yǎng)48h,觀察菌落形態(tài),并做涂片染色鏡檢,判斷是否指示菌生長,若有指示菌生長，判為滅菌不合格；若無指示菌生長,判為滅菌合格,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,無菌檢驗的定義：指檢查經滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無菌器械以及適用于無菌室的其他品種是否無菌的

26、一種方法。無菌檢驗應在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域內進行應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染對單向流空氣區(qū)域及工作臺面，必須進行潔凈度驗證,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,采樣時間在滅菌處理后，存放有效期內采樣,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,采樣方法縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械： 取5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管（其中一管作陽性對照）與4管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為15ml/管,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,注射器： 取5付注射

27、器，在5ml洗脫液中反復抽吸5次，洗下管內細菌，混和后接種需厭氧菌培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽性對照）與霉菌培養(yǎng)管（共4管）接種量為1ml注射器0.5ml, 2ml注射器1ml, 5～10ml注射器2ml ,20～50ml注射器5ml。培養(yǎng)基用量為接種量2ml以下15ml/管,接種量5ml為40ml/管。,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,手樣鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械： 取2件用蘸有無菌洗脫液的棉拭子反復涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無菌洗脫

28、液中，將采樣液混勻，接種于需氧-厭氧培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽性對照）與霉菌培養(yǎng)基（共4管）。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,檢測方法：需設陽性及陰性對照管待檢樣品的需氧-厭氧培養(yǎng)管及陽性與陰性對照管30 ～ 35 ℃培養(yǎng)5天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管20 ～ 25 ℃培養(yǎng)7天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長。如不能從外觀判斷的樣品需作涂片染色鏡檢。,醫(yī)療器械采樣及檢查方法,無菌檢驗的結果判斷