玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、滅菌實驗

1、玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、滅菌一、實驗目的要求1、進一步加強學習、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技術。2、為下一次的課做好器材的準備工作。二、原理為確保實驗順利地進行，要求把實驗所用的玻璃器皿清洗干凈。為保持滅菌后和無菌狀態(tài)，需要對培養(yǎng)皿、吸管等進行包扎，對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單，但如操作不當或不安操作規(guī)定去做，則會影響實驗結果，甚至會導致試驗的失敗。滅菌原理：高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一

2、個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在1213℃滅菌20分鐘即可。干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。細胞內的蛋白質凝固性與其本

3、身的含水量有關，在菌體受熱時，當環(huán)境和細胞內含水量越大，則蛋白質凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160—170℃），時間長（1—2小時）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱滅菌。三、試劑和儀器（一）儀器高壓蒸汽滅菌鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報紙、硅膠塞等四、實驗內容（一）玻璃器皿

4、的清洗：l新購的玻璃器皿的洗滌將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，以除去游離的堿性物質，最后用流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。l常用舊玻璃器皿的洗滌確實無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進行刷洗；吸取過化學試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。l帶菌玻璃器皿的洗滌

5、凡實驗室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，必須經過高溫滅菌或消毒后才能進行刷洗：1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品，做完實驗后放入消毒桶內，用0.1MPa滅菌20～30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的滅菌，底蓋要分開放入不同的桶中，再進行高壓滅菌。2、帶菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內消毒24h后，再經0.1MPa滅菌20min后，取出沖洗。3、帶菌

6、載玻片及蓋玻片，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內消毒24h后，用夾子取出經清水沖干凈。易造成漏氣，達不到徹底滅菌的目的。3、通電加溫，打開排氣活門，排盡鍋內的空氣。通常當壓力表指針升至5磅或0.05MPa時，打開排氣活門放氣，待壓力表指針降至零點一小段時間后，再關閉活門。即活門沖出的全部是蒸汽時則表示徹底，此時可關閉排氣活門，如果過早關閉活門，排氣不徹底，也達不到徹

7、底滅菌的目的。4、恒溫滅菌:0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘。壓力表的指針上升時，鍋內溫度也逐漸升高，當壓力表指針升至0.1MPa時或15磅時，鍋內溫度相當于120℃～121℃（等于一個大氣壓），此時開始計算滅菌時間，控制熱源，使處于0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘，即能達到完全滅菌的目的，然后停止加溫。當達到所需溫度時開始計時，并在此溫度下保持所需的時間。5、降溫：自然降溫或打開活門排汽降溫。稍微打開一點排氣活門，

8、使鍋內蒸汽緩慢排除，然后逐漸開大活門，氣壓徐徐下降，注意勿使排氣過快，否則會使鍋內的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾染棉花塞，但排氣太慢又使培養(yǎng)基在鍋內，受高溫處理時間過長，對培養(yǎng)基也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。6、當鍋內蒸汽完全排盡時即壓力表指針降到零時，要立即打開鍋蓋。7、取出滅菌物品：當鍋內溫度下降到60℃左右時器材或培養(yǎng)基。如培養(yǎng)基需制備固體斜面培養(yǎng)基時，則應趁熱將試管斜放在桌上，上面蓋上報紙以免落灰塵，冷卻后便可收起