多色探針熔解曲線分析技術(shù)在代謝酶相關(guān)基因突變檢測中的研究和應(yīng)用.pdf

1、作為均相突變檢測技術(shù)，多色探針熔解曲線分析技術(shù)因具有快速簡便、靈敏特異、高通量、低成本等優(yōu)點，自本實驗室提出以來，正越來越多地用于分子診斷領(lǐng)域。本論文將多色探針熔解曲線分析技術(shù)應(yīng)用于葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)常見基因突變的檢測和華法林(Warfarin)、氯吡格雷(Clopidogrel)常見藥物敏感性SNP位點的多態(tài)性分析，全面考察該技術(shù)檢測多種突變的能力。<

2、br>　　 第一章，闡述基因突變與人類疾病以及基因多態(tài)性與藥物代謝之間的重大關(guān)系，并介紹現(xiàn)有基因突變檢測及基因多態(tài)性分析的分子生物學(xué)方法及其各自的優(yōu)缺點，隨后提出本論文的檢測對象、檢測目標(biāo)和研究意義。
　　 第二章，概述G6PD缺乏癥的發(fā)現(xiàn)及其分子機制，并且介紹了臨床最常用的生化檢測方法及其優(yōu)缺點，同時總結(jié)了目前G6PD缺乏癥基因診斷的研究進展。隨后，根據(jù)中國地區(qū)G6PD缺乏癥各突變類型的發(fā)生頻率，利用多色探針熔解曲線分析技術(shù)

3、建立了兩管三色的突變檢測體系，實現(xiàn)了對中國人群常見的17個G6PD基因的突變位點或多態(tài)性位點進行同時檢測和基因分型。該體系的檢測限達50 pg/反應(yīng)，同時，對763份臨床標(biāo)本進行了雙盲測試，選取與臨床生化檢測結(jié)果不一致的樣本128例進行測序驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有10例發(fā)生本體系檢測范圍之外的突變，其余118例均與測序結(jié)果一致，特異性達100％。與臨床使用的生化檢測方法相比，本技術(shù)大大提高了對女性雜合子的檢出率，適用于大規(guī)模的人群篩查。

4、　　 第三章，對藥物基因組學(xué)的研究進展及其應(yīng)用進行綜述，以臨床研究較多的華法林和氯吡格雷為研究對象，利用多色探針熔解曲線分析技術(shù)檢測其藥物靶標(biāo)基因常見的SNP位點，建立了兩個單管四色檢測體系，其中一管檢測華法林靶標(biāo)基因常見的4個SNP位點，另一管檢測氯吡格雷靶標(biāo)基因常見的4個SNP位點。通過對兩個體系檢測靈敏度的考察和人類基因組DNA的檢測，驗證了該體系進行基因SNP位點分析的準確性和有效性，其檢測限達50 pg/反應(yīng)，特異性達100