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1、DGGE操作指南操作指南第一部分：操作前準(zhǔn)備第一部分：操作前準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備1.1.40%40%丙烯酰胺丙烯酰胺雙丙烯酰胺儲(chǔ)存液雙丙烯酰胺儲(chǔ)存液250xTAE緩沖液緩沖液高壓滅菌高壓滅菌2030min3.變性劑變性劑脫氣脫氣1015min，過，過0.45μ膜。膜。4℃4℃棕色瓶中保存。棕色瓶中保存。100%變性劑變性劑EDTA乙酸甲酰胺TEMED（tetramethylethylenediamine，四甲基乙二胺）過硫酸銨Trito
2、n硝酸銀100%乙醇NaOH甲醛溴酚藍(lán)二甲苯藍(lán)甘油。第二部分：第二部分：DGGE操作步驟操作步驟1.將海綿墊固定在制膠架上，把類似‘三明治’結(jié)構(gòu)的制膠板系統(tǒng)垂直放在海綿上方，用分布在制膠架兩側(cè)的偏心輪固定好制膠板系統(tǒng)，注意一定是短玻璃的一面正對(duì)著自己。2.共有三根聚乙烯細(xì)管，其中兩根較長(zhǎng)的為15.5cm，短的那根長(zhǎng)9cm。將短的那根與Y形管相連，兩根長(zhǎng)的則與小套管相連，并連在30ml的注射器上。3.在兩個(gè)注射器上分別標(biāo)記‘高濃度’與‘低
3、濃度’，并安裝上相關(guān)的配件，調(diào)整梯度傳送系統(tǒng)的刻度到適當(dāng)?shù)奈恢谩?.反時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)凸輪到起始位置。為設(shè)置理想的傳送體積，旋松體積調(diào)整旋紐。將體積設(shè)置顯示裝置固定在注射器上并調(diào)整到目標(biāo)體積設(shè)置，旋緊體積調(diào)整旋紐。例如1616cmgels(1mmthick)：設(shè)體積調(diào)整裝置到14.5。5.配制兩種變性濃度的丙烯酰胺溶液到兩個(gè)離心管中。6.每管加入18μlTEMED，80μl10%APS，迅速蓋上并旋緊帽后上下顛倒數(shù)次混勻。用連有聚乙烯管標(biāo)有
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