雜色鮑(Haliotis diversicolor)異物代謝酶對(duì)苯并[a]芘暴露和細(xì)菌感染的應(yīng)答特性研究.pdf

1、雜色鮑(Haliotis diversicolor)屬軟體動(dòng)物門(mén)，腹足綱，前鰓亞綱，原始腹足目，鮑科，是我國(guó)南方鮑種，因其生長(zhǎng)迅速，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，在南海海域得到廣泛養(yǎng)殖。但長(zhǎng)期以來(lái)遭受疾病困擾，致使鮑魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)常遭受重大損失，而迄今尚無(wú)有效的免疫防治措施。為探索鮑的免疫相關(guān)機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)室前期利用SSH技術(shù)，構(gòu)建了細(xì)菌攻毒雜色鮑血淋巴細(xì)胞SSH cDNA文庫(kù)，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染下雜色鮑血淋巴細(xì)胞中細(xì)胞色素P450(CYP7A1)與谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶

2、(abGSTsigma)基因上調(diào)表達(dá)，推測(cè)在鮑體內(nèi)CYP7A1與abGSTsigma不僅參與異源物質(zhì)的代謝過(guò)程，也可能參與機(jī)體的免疫應(yīng)答過(guò)程。本研究擬在此基礎(chǔ)上，對(duì)雜色鮑分別進(jìn)行BaP暴露與細(xì)菌攻毒，觀察在兩個(gè)不同刺激過(guò)程中CYP7A1與abGSTsigma基因分別在雜色鮑體內(nèi)的誘導(dǎo)表達(dá)情況，從而對(duì)CYP7A1與abGSTsigma是否參與異源物質(zhì)的代謝以及可能的免疫應(yīng)答過(guò)程做出分析。取得的主要研究成果如下。 1，利用RACE技

3、術(shù)克隆了雜色鮑CYP7A1與abGSTsigma cDNA全長(zhǎng)序列：CYP7A1 cDNA序列(GeneBank登錄號(hào)為EF587282)全長(zhǎng)2185bp，包含一個(gè)1494bp的開(kāi)放閱讀框，編碼498個(gè)氨基酸，其理論分子量為57557.0Da，等電點(diǎn)為6.56。abGSTsigma cDNA序列全長(zhǎng)1328bp(GeneBank登錄號(hào)為EF546619)。包含有一個(gè)624bp ORF，編碼208個(gè)氨基酸，其理論分子量為23.67KDa，

4、等電點(diǎn)為5.67。 2， CYP7A1與abGSTsigma mRNA在健康雜色鮑的存在情況：利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)了CYP7A1與abGSTsigma在健康雜色鮑體內(nèi)的不同組織器官(鰓、血淋巴細(xì)胞、消化腺、外套膜、腹足、上足、性腺、腎、粘液腺)中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況，結(jié)果表明abGSTsigma、CYP7A1基因均廣泛的在各種組織中表達(dá)。其中外套膜，鰓等表達(dá)量較高，腹足，消化腺和次之，血淋巴細(xì)胞表達(dá)量最低。

5、3，在BaP暴露條件下CYP7A1與abGSTsigma兩種基因在雜色鮑不同組織中的表達(dá)變化：在BaP誘導(dǎo)下abGSTsigma在消化腺、鰓、外套膜、血淋巴細(xì)胞4個(gè)組織中均上調(diào)表達(dá)，酶活性也有提高。而CYP7A1則僅在血淋巴細(xì)胞中有上調(diào)表達(dá)，在外套膜、消化腺、鰓中無(wú)上調(diào)表達(dá)。 4，在細(xì)菌攻毒條件下CYP7A1與abGSTsigma兩種基因在雜色鮑不同組織中的表達(dá)變化：abGSTsigma在被檢測(cè)的4個(gè)組織中均顯著上調(diào)表達(dá)，酶活性