結(jié)核病診斷技術(shù)

1、第2章實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查，特別是細(xì)菌學(xué)檢查是結(jié)核病確診和治療的主要依據(jù)。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)主要包括4項(xiàng)基本技術(shù)，即涂片染色鏡檢、分枝桿菌分離培養(yǎng)、分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)、分枝桿菌菌種鑒定。檢驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)臨床醫(yī)師檢驗(yàn)申請(qǐng)要求并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備和技術(shù)條件，負(fù)責(zé)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，及時(shí)、準(zhǔn)確地填寫(xiě)檢驗(yàn)報(bào)告。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)、外研究者在分子生物學(xué)、分子微生物學(xué)及免疫學(xué)領(lǐng)域建立了若干快速、敏感、特異的檢測(cè)新技術(shù)，為可疑結(jié)核病患者的

2、早期診斷與合理治療帶來(lái)了新的希望。列入“規(guī)范”的結(jié)核桿菌臨床基因擴(kuò)增(PCR)檢驗(yàn)技術(shù)、分枝桿菌快速培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn)技術(shù)、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，因有多種試劑盒(試劑)及分析儀器可供選擇，目前尚難制定統(tǒng)一的技術(shù)操作規(guī)范，故暫定為輔助操作技術(shù)。具備開(kāi)展這些技術(shù)項(xiàng)目條件的實(shí)驗(yàn)室(或檢驗(yàn)科)，須經(jīng)有關(guān)主管部門(mén)批準(zhǔn)后，嚴(yán)格按照相應(yīng)技術(shù)所附的說(shuō)明書(shū)與操作規(guī)程實(shí)施。鑒于結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查，特別是細(xì)菌學(xué)檢查在結(jié)核病控制工作中的重要性，為保障相應(yīng)檢查項(xiàng)目結(jié)果

3、的可靠性，要求相應(yīng)的檢查項(xiàng)目必須由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)并考核合格的專(zhuān)職人員完成，且開(kāi)展相應(yīng)檢查的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備安全操作設(shè)施，制定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制措施，同時(shí)接受專(zhuān)業(yè)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制督導(dǎo)和培訓(xùn)。第一節(jié)第一節(jié)結(jié)核茵檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則結(jié)核茵檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室必須具有與其服務(wù)級(jí)別相應(yīng)的裝備，其原則是能滿足該級(jí)別實(shí)驗(yàn)室的需要，使實(shí)驗(yàn)室工作人員得到充分的防護(hù)，并避免造成環(huán)境污染。1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有合理布局及合適的單向(外排)通風(fēng)體系。2

4、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備，以保護(hù)工作人員的安全和實(shí)驗(yàn)工作的順利進(jìn)行。分離培養(yǎng)、藥物敏感性測(cè)定、菌種鑒定試驗(yàn)等操作應(yīng)設(shè)有生物安全操作柜或接種間和通風(fēng)櫥等。3實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)按正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等。4實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理。5建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等。6進(jìn)行下列操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照技術(shù)操作規(guī)范，防止產(chǎn)生細(xì)菌氣溶膠：①涂片制作；②培養(yǎng)液的傾倒和轉(zhuǎn)移；③高速混合含

5、菌液體；④滴加、接種培養(yǎng)物；⑤吸管稀釋和混合菌懸液；⑥取樣器和振蕩器的使用；⑦細(xì)菌細(xì)胞超聲粉碎；⑧感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。二、直接涂片法1痰液及膿液用接種環(huán)或?qū)Ｓ弥窈炋羧?biāo)本的膿樣、干酪樣部分005～01ml，于玻片正面的右側(cè)2／3中央處均勻涂抹成2cm25cm橢圓形痰膜，自然干燥。2病灶組織或干酪塊先用組織研磨器磨碎后再行涂片。3尿液及胸、腹水標(biāo)本留全量夜尿或胸、腹水，靜置4～5h后，棄上清液，取沉淀部分約10ml，經(jīng)6000～8000r／m

6、in(6000～8000rpm)離心20min，取沉渣涂片。4腦脊液無(wú)菌操作收集腦脊液，放置冰箱或室溫24h，薄膜形成后涂片。也可將腦脊液經(jīng)6000～8000r／min離心20min，棄上清液，取沉淀物涂片。5糞便標(biāo)本與生理鹽水混勻后，充分振蕩使之成為混懸液；定性濾紙過(guò)濾后，濾液經(jīng)6000～8000r／min離心20min，取沉淀涂片檢查。6咽喉棉拭子棉拭子放入無(wú)菌試管，加入適量生理鹽水浸泡，并強(qiáng)烈振蕩，取出棉拭子后，液體經(jīng)6000～8

7、000r／min離心20min后，取沉淀涂片檢查。三、集菌涂片法1漂浮集菌法取深咳痰或12～24h痰液經(jīng)121℃高壓滅菌15min，待冷卻后，取5～10ml盛于容積為100ml的玻璃容器中(口徑約2cm)，加滅菌蒸餾水20～30ml，總體積勿超過(guò)容器的1／3，加二甲苯03ml，放振蕩器振蕩10min，取出，加蒸餾水至滿瓶口，將已編號(hào)的載物玻片蓋于瓶口上，靜置20min，取下載玻片，自然干燥，火焰固定，染色鏡檢。2離心集茵法取深咳痰或12

8、～24h痰液經(jīng)121℃高壓滅菌15min，待冷卻后，取5～10ml盛于容積為500ml的離心管中，加水至50ml，經(jīng)6000～8000r／min離心20min后，取沉淀涂片檢查。四、染色、鏡檢方法(一)萋?tīng)栆荒釥栠d抗酸染色法萋?tīng)栆荒釥栠d(Ziehl—Neelsen)抗酸染色法，簡(jiǎn)稱萋一尼氏染色法。1染色液染色劑——08％苯酚(石炭酸)復(fù)紅溶液脫色劑——5％鹽酸乙醇液復(fù)染劑——03‰亞甲藍(lán)溶液2染色步驟(1)涂片自然干燥后，火焰固定。(2